[發明專利]一種高產O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌及其應用

有效

• 申請號: 202011002103.3
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112063572B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 柳志強;劉鵬;張博;牛坤;鄭裕國
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12N15/67;C12N15/54;C12N15/53;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

1.一種高產O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌，由如下方法構建獲得：

（1）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，將大腸桿菌E. coli W3110中的metJ、metI、metB、thrB、metA、lysA和iclR基因敲除，并將rhtA、thrA和eamA基因的原位啟動子替換為trc啟動子，得到重組菌株OAH-1；

（2）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，敲除菌株OAH-1中的glpR基因，并用trc啟動子替換glpF基因和glpD基因的原位啟動子，得到重組菌株OAH-II；

（3）將來源于谷氨酸棒桿菌的高絲氨酸乙?；D移酶基因met X連接到質粒pTrc99A中，得到表達載體pTrc99A-metX，將pTrc99A-metX導入重組菌株OAH-II中，即得所述高產O-乙酰-L-高絲氨酸重組大腸桿菌。

2.一種高產O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌，其特征在于所述重組大腸桿菌按如下方法構建：

（1）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，將大腸桿菌E. coli W3110中的metJ、metI、metB、thrB、metA、lysA和iclR基因敲除，并將rhtA、thrA和eamA基因的原位啟動子替換為trc啟動子，得到重組菌株OAH-1；

（2）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，敲除菌株OAH-1中的glpR基因，得到重組菌株OAH-2；

（3）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，用trc啟動子替換重組菌株OAH-2中glpF和glpD基因的原位啟動子，得到重組菌株OAH-8；

（4）將來源于谷氨酸棒桿菌的高絲氨酸乙?；D移酶基因met X連接到質粒pTrc99A中，得到表達載體pTrc99A-metX，將pTrc99A-metX導入重組菌株OAH-8中，即得所述高產O-乙酰-L-高絲氨酸重組大腸桿菌。

3.如權利要求1所述O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌，其特征在于所述步驟（1）和步驟（2）中trc啟動子核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

4.如權利要求2所述O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌，其特征在于所述步驟（1）和步驟（3）中trc啟動子核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

5.如權利要求1或2所述O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌，其特征在于所述高絲氨酸乙酰基轉移酶基因met X核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

6.權利要求1或2所述高產O-乙酰-L-高絲氨酸的重組大腸桿菌在微生物發酵制備O-乙酰-L-高絲氨酸中的應用。