[發明專利]一種全菌膠囊及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011002001.1
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112089736B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 陸敏;張寶鈺;劉丹;張水龍;王一偉;朱永亮;朱蒙蒙
• 申請（專利權）人: 蘇州普瑞森生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A61K35/74;A61K9/48;C12Q1/04;A61P1/00;C12R1/19;C12R1/145;C12R1/01
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種全菌膠囊的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)利用高通量測序篩選糞菌供體；

(2)收集步驟(1)篩選的糞菌供體的糞便，制備糞菌液；

(3)將步驟(2)制備的糞菌液和凍干保護劑混合后進行降溫冷凍和真空干燥，得到的糞菌凍干粉裝入膠囊殼內，得到所述全菌膠囊；

步驟(1)所述利用高通量測序篩選糞菌供體的方法包括以下步驟：

(1’)將提取自糞菌供體的DNA和/或RNA進行二代測序，獲得原始測序數據；

(2’)去除原始測序數據的宿主基因后，與微生物數據庫進行比對，進行菌種鑒定和豐度檢測；

(3’)與致病菌數據庫進行比對，確認糞菌供體中無致病菌；

(4’)與糞菌受體的腸道菌群進行比較，篩選得到與糞菌受體互補的糞菌供體；

步驟(1)所述利用高通量測序篩選糞菌供體根據糞菌供體表達的生物標志物和所述生物標志物的多樣性指數；

所述生物標志物包括大腸桿菌、多支梭菌、柱狀真桿菌、人羅斯拜瑞氏菌、普拉梭菌、脆弱擬桿菌和普通擬桿菌；

所述生物標志物的多樣性指數包括所述生物標志物的α多樣性指數；

篩選的糞菌供體表達生物標志物大腸桿菌、多支梭菌、柱狀真桿菌、人羅斯拜瑞氏菌、普拉梭菌、脆弱擬桿菌和普通擬桿菌，生物標志物的α多樣性為163804.8，其中，健康正相關的生物標志物為多支梭菌、柱狀真桿菌、人羅斯拜瑞氏菌、普拉梭菌和普通擬桿菌，健康負相關的生物標志物為大腸桿菌和脆弱擬桿菌；

在健康人群中，對每個健康正相關的微生物進行boxplot分析，得出每個微生物的中位值；在患者中，對每個健康負相關的微生物進行boxplot分析，得出每個微生物的中位值；將每個微生物的中位值作為供體篩選的標準值；

糞菌供體的篩選標準為：每個健康正相關的微生物的值大于該微生物的標準值，每個健康負相關的微生物的值小于該微生物的標準值。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2’)所述微生物數據庫包括來源于公共數據庫的細菌基因組、真菌基因組或病毒基因組中的任意一種或至少兩種的組合。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3’)所述致病菌數據庫包括來源于公共數據庫的致病菌基因組。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述糞菌液的制備方法包括以下步驟：

(1”)將收集的糞便浸泡于無菌生理鹽水中，過濾后得到糞便濾液；

(2”)將糞便濾液離心處理，取沉淀與無菌生理鹽水混合，得到所述糞菌液。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(1”)所述無菌生理鹽水的溫度為3～5℃。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(1”)所述過濾采用濾網進行。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述濾網的孔徑為0.25～2mm。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(1”)所述過濾包括依次使用2.0mm、1.0mm、0.5mm和0.25mm的濾網去除大顆粒物，隨后使用0.25mm的濾網過濾2～3次，得到的液相為糞便濾液。

9.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2”)所述離心處理的轉速為1500～3000r/min。

10.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2”)所述離心處理的時間為10～20min。

11.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述凍干保護劑包括脫脂乳粉、海藻糖、蔗糖、維生素C和無菌生理鹽水。