[發明專利]一種分離純化人抗凝血酶Ⅲ的方法

在審

• 申請號: 202011001163.3
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN114249817A
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 胡吉軍;周羽翕;陳嬌;何炫;陳翔宇;高玲;王強;蔣德席
• 申請（專利權）人: 四川遠大蜀陽藥業有限責任公司
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K1/22;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種分離純化人抗凝血酶Ⅲ的方法，包括采用親和層析對人抗凝血酶Ⅲ進行分離純化，其特征在于，所述親和層析的凝膠是以單分散多孔交聯聚丙烯酸酯微球為基質與肝素鈉偶聯所得，所述單分散多孔交聯聚丙烯酸酯微球經過表面親水化改性；采用所述親和層析對人抗凝血酶Ⅲ進行分離純化，人抗凝血酶Ⅲ的柱保留時間縮短至不超過3min。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的粒徑為65μm。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的孔徑為

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述親和層析是UniGel-65 Heparin親和層析。

5.根據權利要求1～4任一項所述的方法，其特征在于，所述親和層析包括如下步驟：含有人抗凝血酶Ⅲ的樣品上親和層析柱后，先使用平衡液沖洗層析柱至少1個柱體積，再使用洗滌液洗滌；

優選地，所述平衡液沖洗層析柱1-2個柱體積。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述平衡液含：0.01-0.03mol/L枸櫞酸鈉，0.1-0.14mol/L氯化鈉，pH 6.0-8.0。

7.根據權利要求1～4任一項所述的方法，其特征在于，所述親和層析包括如下步驟：含有人抗凝血酶Ⅲ的樣品上親和層析柱后，用洗滌液洗滌，所述洗滌液的電導率為20～45mS/cm。

8.根據權利要求5或7任一項所述的方法，其特征在于，所述含有人抗凝血酶Ⅲ的樣品任選自：去冷沉淀血漿，或去冷沉淀血漿經DEAE Sephdex A50凝膠吸附后得到的DEAESephdex A50吸附后血漿或以DEAE Sephdex A50吸附后血漿為起始原料分離純化人抗凝血酶Ⅲ的中間樣品，

或改良K-N法組份Ⅳ沉淀溶解液或以改良K-N法組份Ⅳ沉淀溶解液為起始原料分離純化人抗凝血酶Ⅲ的中間樣品，

或Cohn組分IV-1沉淀溶解液或以Cohn組分IV-1沉淀溶解液為起始原料分離純化人抗凝血酶Ⅲ的中間樣品。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述含有人抗凝血酶Ⅲ的樣品是去冷沉淀血漿經DEAE Sephdex A50凝膠吸附后得到的DEAE Sephdex A50吸附后血漿，所述親和層析步驟具體方法如下：a平衡預先使用平衡液沖洗層析柱直至電導平穩且與平衡液相同；b上樣DEAE Sephdex A50吸附后血漿過濾后上UniGel-65 Heparin親和層析柱；c沖洗使用平衡液沖洗層析柱1-2個柱體積；d洗滌使用洗滌液進行洗滌直至UV峰洗至基線；e洗脫使用洗脫液洗脫直至UV峰洗至基線，收集洗脫液即得到高純度人抗凝血酶Ⅲ溶液。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述平衡液為：0.01-0.03mol/L枸櫞酸鈉，0.1-0.14mol/L氯化鈉，pH 6.0-8.0；

和/或所述洗滌液為：0.01-0.03mol/L枸櫞酸鈉，0.3-0.6mol/L氯化鈉，pH 6.0-8.0；

和/或所述洗脫液為：0.01-0.02mol/L枸櫞酸鈉，1.5-2.5mol/L氯化鈉，pH 6.0-8.0。