[發(fā)明專利]一種預(yù)測CHB患者中HBsAg清除的免疫學指標的檢測方法

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• 申請日: 2020-09-21
• 公開（公告）號: CN112379099A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊淑娥;祝丹;劉嘉;鄭昕
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/576
• 代理公司: 北京汲智翼成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11381
• 代理人: 陳曦;陳琳

本發(fā)明公開了一種預(yù)測CHB患者中HBsAg清除的免疫學指標的檢測方法，包括以下步驟：分子的篩選，初步篩選出評估機體T細胞功能的免疫學指標，收集HBsAg陽性和清除CHB患者以及健康對照的血樣；檢測方法，收集患者的血樣，進行細胞重懸種植，配置抗體；進行流式細胞術(shù)的檢測，并保存數(shù)據(jù)，利用軟件Flow Jo software V10.0.7進行數(shù)據(jù)分析；預(yù)測效能的評估。本發(fā)明成功發(fā)現(xiàn)了可預(yù)測CHB患者48周內(nèi)HBsAg陰轉(zhuǎn)的T細胞免疫學指標HLA?DR。在本發(fā)明中，首次利用CD4和CD8T細胞的HLA?DR的表達水平預(yù)測CHB患者48周內(nèi)的HBsAg陰轉(zhuǎn)，而且其靈敏度和特異度分別高達83.33％和72.34％，對評估CHB患者抗病毒療效具有重要的臨床意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫學指標的檢測方法，尤其涉及一種預(yù)測CHB患者中HBsAg清除的免疫學指標的檢測方法，屬于醫(yī)療免疫學技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒(HBV)仍是一大主要的公共衛(wèi)生問題，全球超過四億人感染HBV。世界衛(wèi)生組織頒布的有關(guān)病毒性肝炎全球策略中提出消滅乙型肝炎病毒(HBV)是可能實現(xiàn)的目標。目前，大部分的臨床實踐指南都推薦慢性乙型肝炎(CHB)治療最理想的終點是實現(xiàn)功能性治愈，這種治愈定義為乙肝表面抗原(HBsAg)的血清學清除伴或不伴有HBsAg的血清學轉(zhuǎn)換，之所以提出以上目標，是因為達到HBsAg的清除可以制止疾病的進展以及減少原發(fā)性肝癌發(fā)生的風險。

HBsAg的清除在未接受抗病毒治療或接受核苷(酸)類似物的CHB患者中發(fā)生率極低，近年來隨著干擾素α聯(lián)合或序貫治療的運用，CHB患者中HBsAg的清除率大大增加。干擾素α主要通過直接抑制感染細胞中RNA和相關(guān)蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，以及通過阻斷核衣殼蛋白的組裝從而抑制病毒的復制。再者，干擾素α還有免疫調(diào)節(jié)的作用，如調(diào)節(jié)T細胞、NK細胞的免疫活化等作用。因此，經(jīng)過核苷(酸)類似物長期有效抗病毒治療后的CHB患者接受干擾素α治療主要是通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能來達到更好的抗病毒作用，甚至是HBsAg的清除。

干擾素α治療主要是通過調(diào)節(jié)機體免疫功能來實現(xiàn)HBsAg的快速下降及清除的，目前臨床上尚缺乏免疫學上相關(guān)的監(jiān)測指標來綜合評估患者抗病毒療效。目前不少的研究干擾素α在CHB患者中抗病毒作用的免疫學機制，但是對于干擾素α在CHB患者中實現(xiàn)HBsAg清除的機制演劇較少，且尚未發(fā)現(xiàn)有效評估或者預(yù)測CHB患者抗病毒療效的免疫學指標。對于聯(lián)合或序貫干擾素α治療的患者，目前臨床上主要通過檢測HBV相關(guān)的病毒學指標及生化指標來評估其抗病毒的療效及預(yù)后，以上指標預(yù)測效果欠佳且較滯后。開展一項簡易且實用的免疫學指標的檢測項目的方法將有利于更加全面地評估患者的免疫學功能，結(jié)合臨床現(xiàn)有的病毒和生化相關(guān)指標評估患者的抗病毒狀態(tài)和療效，從而輔助發(fā)現(xiàn)潛在的有望實現(xiàn)HBsAg清除的潛在優(yōu)勢人群，進一步優(yōu)化抗病毒治療方案，從而使更多的患者實現(xiàn)HBsAg的清除。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種預(yù)測CHB患者中HBsAg清除的免疫學指標的檢測方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述的技術(shù)方案：

一種預(yù)測CHB患者中HBsAg清除的免疫學指標的檢測方法，包括以下步驟：

步驟1、分子的篩選：

a、初步篩選出評估機體T細胞功能的免疫學指標；

b、收集HBsAg陽性和清除CHB患者以及健康對照的血樣；

步驟2、檢測方法：

a、收集患者的血樣，進行細胞重懸種植；

b、配置抗體；

c、進行流式細胞術(shù)的檢測，并保存數(shù)據(jù)，利用軟件Flow Jo software V10.0.7進行數(shù)據(jù)分析；