[發(fā)明專利]牛結(jié)節(jié)性皮膚病的競爭ELISA抗體檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010988707.3
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN112198311A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 景志忠;陳國華;賈懷杰;何小兵;房永祥;周廣青;婁忠子;李維克
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;C07K14/065;C12N15/70
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.一種牛結(jié)節(jié)性皮膚病的競爭ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括：包被有GTPV-ORF117編碼的抗原蛋白的酶標(biāo)板、競爭抗體、酶標(biāo)二抗、及顯色底物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛結(jié)節(jié)性皮膚病的競爭ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于GTPV-ORF117編碼的抗原蛋白為重組蛋白，所述的競爭抗體為抗GTPV-ORF117蛋白的兔多克隆抗體，所述的酶標(biāo)二抗為以HRP標(biāo)記的鼠抗兔抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的牛結(jié)節(jié)性皮膚病的競爭ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于試劑盒內(nèi)還有樣品稀釋液、其中含有吐溫的磷酸緩沖液、酶底物TMB和終止液2M的硫酸。

4.權(quán)利要求1至3所述的任一牛結(jié)節(jié)性皮膚病的競爭ELISA抗體檢測試劑盒制備方法，其特征在于以山羊痘病毒GTPV提取的基因組DNA為模板，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2為引物擴增得到ORF117胞外區(qū)擴增片段，將擴增片段酶切構(gòu)建到pET-30a原核表達(dá)載體中，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)，制備ORF117胞外區(qū)蛋白并包被于酶標(biāo)板上，封閉；以O(shè)RF117胞外區(qū)蛋白免疫兔子，收集抗ORF117蛋白兔血清制備競爭抗體，并以鼠抗兔HRP-IgG為酶標(biāo)二抗。