[發明專利]一種鑒定大豆抗大豆花葉病毒SC3株系的SSR標記CH0211及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202010986972.8
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN111996282B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 李凱;蔡晗;沈穎;陳圓圓;謝麗君;陳柏羽
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 競存;徐冬濤

1.鑒定大豆抗大豆花葉病毒SC3株系的SSR標記CH0211，其特征在于，所述SSR標記的引物序列如下：

上游引物SEQ ID NO.1：5’-CAGGTCGATAAGTCTATGT-3’；

下游引物SEQ ID NO.2：5’-ATATGAACTCGGTCTGTTG-3’。

2.一種利用權利要求1所述SSR標記CH0211的引物鑒定大豆抗大豆花葉病毒SC3株系的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：提取待鑒定大豆的基因組DNA，以待鑒定大豆的基因組DNA為模板，用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的SSR標記引物進行PCR擴增；

S2：在步驟S1所得擴增產物加入溴酚藍染色，用8%濃度的聚丙烯酰胺凝膠進行分離，銀染后進行帶型分析，所述帶型分析為：如擴增產物包含大小為123bp的目的條帶，則待鑒定大豆為抗大豆花葉病毒SC3株系品種。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，S1所述PCR擴增的PCR擴增體系為10μL，包括2×Taq Plus MasterMix5μL，所述上游引物0.5μL，所述下游引物0.5μL，終濃度＜0.1μg/10μL的模板DNA 1μL，ddH₂O 3μL。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，S1所述PCR擴增的PCR反應條件為94℃預變性2min；94℃變性20s ，50℃退火20s ，72℃延伸20s ，運行32個循環，然后72℃終延伸2min后于4℃保存。

5.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，S2所述8%濃度的聚丙烯酰胺凝膠分離條件為：電壓200V，電流150A條件下于5×TBE緩沖液中電泳分離45min。

6.權利要求1中所述的SSR標記的引物，或權利要求2所述的檢測方法在篩選抗大豆花葉病毒SC3株系的大豆種質中的應用，其特征在于，擴增產物包含大小為123bp的目的條帶，則待鑒定大豆為抗大豆花葉病毒SC3株系品種。