[發(fā)明專利]一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌培養(yǎng)基及其篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010986517.8
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN112063682A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉威;王菁華;郭新明;孫義敏;李月興;王松;方振興;姜明月;張文天;潘虹;曾穎;張超
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 岳泉清

一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌培養(yǎng)基及其篩選方法，本發(fā)明涉及嗜鐵細(xì)菌的培養(yǎng)基及其篩選方法領(lǐng)域。本發(fā)明要解決現(xiàn)有使用Pipes為緩沖液篩選嗜鐵細(xì)菌時需要調(diào)節(jié)pH，操作復(fù)雜的技術(shù)問題。該培養(yǎng)基為CAS檢測平板培養(yǎng)基；方法：采集樣品；制備LB液體培養(yǎng)基；制備CAS檢測平板培養(yǎng)基；將樣品加入到LB液體培養(yǎng)基，稀釋；將稀釋菌液涂布在CAS檢測平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)。本發(fā)明加入了特定的磷酸緩沖液，由于磷酸鹽緩沖液緩沖能力強(qiáng)，在配制及培養(yǎng)過程中無需調(diào)pH及補(bǔ)加哌嗪二乙醇磺酸鈉作為輔助，操作簡便，嗜鐵細(xì)菌篩選效果提高；并用五大連池重碳酸礦泉水替代蒸餾水，縮短篩菌培養(yǎng)時間。本發(fā)明用于篩選五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及嗜鐵細(xì)菌的培養(yǎng)基及其篩選方法領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鐵是地殼中含量居于第4位的元素，但其溶解性差，生物利用性極其有限。在有氧和中性pH值時，鐵以難溶Fe(OH)₃形式存在，在低鐵環(huán)境下，絕大多數(shù)細(xì)菌和真菌都能通過非核糖體途徑合成并分泌一種或幾種嗜鐵素(siderophore，又名高鐵載體)。這些嗜鐵素被分泌到微生物的細(xì)胞外或細(xì)胞表面作為螯合因子來獲取Fe³⁺或者將鐵變?yōu)榭扇苄问揭员阄⑸锢茫鼈兣cFe³⁺的特異性結(jié)合能力非常強(qiáng)(解離常數(shù)Ks為1022～1050)，并且嗜鐵素可以從各種水溶性和非水溶性的化合物中奪走Fe³⁺。它廣泛用于醫(yī)藥、造紙印染工業(yè)，化肥工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。因此，嗜鐵素是一種重要的生物活性物質(zhì)，在生命代謝中起著重要的調(diào)節(jié)作用，對其的研究具有重要的理論和應(yīng)用指導(dǎo)意義。

五大連池冷礦泉水享有“神泉”、“圣水”的美譽(yù)，對人類的健康療養(yǎng)具有非常神奇的功效。五大連池冷礦泉的類型多樣，其中藥泉山鐵質(zhì)重碳酸鹽礦水區(qū)被開發(fā)得最為全面。然而，從天然重碳酸礦泉水中篩選分泌嗜鐵素的嗜鐵菌研究未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決現(xiàn)有使用Pipes為緩沖液篩選嗜鐵細(xì)菌時需要調(diào)節(jié)pH，操作復(fù)雜的技術(shù)問題，而提供一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌培養(yǎng)基及其篩選方法。

一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基為CAS檢測平板培養(yǎng)基；

CAS檢測平板培養(yǎng)基包括CAS藍(lán)色檢測液、磷酸鹽緩沖液和混合液，

其中CAS藍(lán)色檢測液由鉻天青(CAS)溶液、FeCl₃鹽酸溶液和十六烷基三甲基溴化銨溶液混合而成；

磷酸鹽緩沖液采用Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、KH₂PO₄、NH₄Cl、NaCl和去離子水配制；

混合液由蔗糖溶液、酸水解酪蛋白溶液、CaCl₂溶液、MgSO₄溶液、瓊脂和五大連池重碳酸礦泉水混合獲得。

所述一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細(xì)菌的篩選方法，具體按以下步驟進(jìn)行：

一、采集五大連池重碳酸礦泉水水源地的水樣或泥樣，獲得樣品，采集深度為5～10厘米；

二、配制LB液體培養(yǎng)基：將酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸餾水混合均勻，分裝，滅菌處理，獲得LB液體培養(yǎng)基；

三、配制CAS檢測平板培養(yǎng)基：

A、將鉻天青溶于去離子水中，再加入FeCl₃鹽酸溶液，獲得溶液a；

B、將十六烷基三甲基溴化銨溶于去離子水中，獲得溶液b；

C、將溶液a加入到溶液b中，混合均勻，滅菌處理，得到CAS藍(lán)色檢測液；