[發明專利]一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌培養基及其篩選方法

在審

• 申請號: 202010986517.8
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN112063682A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 劉威;王菁華;郭新明;孫義敏;李月興;王松;方振興;姜明月;張文天;潘虹;曾穎;張超
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院自然與生態研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌培養基，其特征在于該培養基為CAS檢測平板培養基；

CAS檢測平板培養基包括CAS藍色檢測液、磷酸鹽緩沖液和混合液，

其中CAS藍色檢測液由鉻天青溶液、FeCl₃鹽酸溶液和十六烷基三甲基溴化銨溶液混合而成；

磷酸鹽緩沖液采用Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、KH₂PO₄、NH₄Cl、NaCl和去離子水配制；

混合液由蔗糖溶液、酸水解酪蛋白溶液、CaCl₂溶液、MgSO₄溶液、瓊脂和五大連池重碳酸礦泉水混合獲得。

2.一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法，其特征在于該方法具體按以下步驟進行：

一、采集五大連池重碳酸礦泉水水源地的水樣或泥樣，獲得樣品，采集深度為5～10厘米；

二、配制LB液體培養基：將酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸餾水混合均勻，分裝，滅菌處理，獲得LB液體培養基；

三、配制CAS檢測平板培養基：

A、將CAS溶于去離子水中，再加入FeCl₃鹽酸溶液，獲得溶液a；

B、將十六烷基三甲基溴化銨溶于去離子水中，獲得溶液b；

C、將溶液a加入到溶液b中，混合均勻，滅菌處理，得到CAS藍色檢測液；

D、采用Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、KH₂PO₄、NH₄Cl、NaCl和去離子水配制磷酸鹽緩沖液；磷酸鹽緩沖液pH為6.8；

E、將磷酸鹽緩沖液稀釋，獲得稀釋緩沖液；

F、將蔗糖溶液、CaCl₂溶液、MgSO₄溶液、瓊脂和五大連池重碳酸礦泉水混合，滅菌處理，獲得混合液，降溫至58～62℃，向混合液加入酸水解酪蛋白溶液、稀釋緩沖液和CAS藍色檢測液，獲得CAS檢測平板培養基；

四、將步驟一獲得的樣品加入到步驟二獲得的LB液體培養基，控制溫度為35～37℃、轉速為190～220r/min條件下振蕩培養45～48h，然后按照10倍稀釋法進行稀釋，獲得稀釋菌液；

五、將步驟四獲得的稀釋菌液均勻涂布在步驟三獲得的CAS檢測平板培養基上，控制溫度為26～28℃恒溫培養3～5d，完成所述一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法。

3.根據權利要求2所述的一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法，其特征在于步驟二所述LB液體培養基中酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl和蒸餾水的用量比為5g∶10g∶10g∶1000mL。

4.根據權利要求2所述的一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法，其特征在于步驟A中CAS與去離子水的質量體積比為0.07g∶50mL，FeCl₃鹽酸溶液與去離子水的體積比為1∶5，FeCl₃鹽酸溶液中FeCl₃的濃度為1mmol·L^-1、HCl的濃度為1mmol·L^-1。

5.根據權利要求2所述的一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法，其特征在于步驟B中十六烷基三甲基溴化銨與去離子水的質量體積比為0.06g∶40mL。

6.根據權利要求2所述的一種五大連池重碳酸礦泉水水源地嗜鐵細菌的篩選方法，其特征在于步驟C中溶液a加入到溶液b的體積比為60∶(37～42)。