[發明專利]一種高效分離脂肪源前體細胞的方法及其應用

在審

• 申請號: 202010985932.1
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN112080462A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 楊嘉
• 申請（專利權）人: 昆明學院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;A61K35/35;A61P17/00;A61P39/00
• 代理公司: 云南凌云律師事務所 53207
• 代理人: 董建國

本發明涉及一種高效分離脂肪源前體細胞的方法，從人體或哺乳動物的脂肪組織塊中，通過紅細胞裂解液和DMEM F/12的混合溶液清洗后，采用組織消化液進行培養，沉淀，離心、過濾處理等步驟后，可從人體皮下脂肪組織中，高效分離獲得高純度和高活性的脂肪源前體細胞，分離獲得的脂肪源前體細胞培養液，具備較高濃度的不同類型的細胞營養因子，所獲得的脂肪源前體細胞及其產物可以用于組織修復。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種高效分離脂肪源前體細胞的方法及其用于組織修復的應用。

背景技術

當前脂肪源前體細胞的分離的方法，主要有剪碎消化法、剪碎貼壁培養法和抽吸法等方法。前述兩種方法都是取出脂肪組織后，破碎組織塊，進行細胞分離。抽吸法包括負壓吸引器抽吸、注射器抽吸；有相關研究表明，采集脂肪時剪碎法對脂肪細胞的損傷最輕，注射器法居中，負壓器吸脂法最重，負壓越大，脂肪細胞的損傷就越大。剪碎貼壁法，則通過細胞從組織塊中遷移出來分離，不能立即分離得到單個細胞，且受供者年齡，健康狀況等因素的影響，分離周期長。剪碎消化法，通過消化酶的作用，可以快速得到單個細胞；但是傳統的消化法，會影響到脂肪源前體細胞的活性和完整性，造成較低的細胞存活率，細胞得率小，無法滿足后續的臨床運用。

以上現有的技術方案均存在一點的弊端，無法快速分離得到優質且大量的脂肪源前體細胞，細胞不具備更高的增殖能力和細胞活性，無法滿足下游的臨床和研究需要，亟待發明一種實現高效分離且能獲得較高純度和活性的脂肪源前體細胞分離技術方案來解決上述技術問題。

發明內容

針對上述提到的問題，本發明提供一種高效分離脂肪源前體細胞的方法及其用于組織修復的應用。

具體技術方案是：一種高效分離脂肪源前體細胞的方法，包括如下步驟：

1）從人體皮下獲取 9mm ³~21mm³的脂肪組織塊；

2）脂肪組織塊用75%酒精沖洗1~2次，擦拭干凈；

3）將脂肪組織塊放入小燒杯中，用眼科剪反復剪切組織至似糊狀；

4）少量基礎培養液，送入CO 2培養箱內靜置1~2天；

5)加入足夠的基礎培養液，培養4~6天，轉移到干凈的離心管中，取400g，離心10分鐘；

棄上清，收集下層組織沉淀；

6）用PBS溶液輕緩漂洗組織沉淀物2～4次；

7）加入3-5ml的0.25％胰蛋白酶溶液于35～38℃條件下消化3～6min，加入基礎培養液終止消化，離心10分鐘；

8）棄上清，使用10倍沉淀體積的DMEMF/12培養液重懸沉淀組織，使用40微米的濾膜過濾；

9）重懸混勻上述過濾液，使用10~20微米的濾膜再一次進行過濾；

10）離心上述步驟9）的組織過濾液，5~7分鐘，收集離心后的沉淀物，使用細胞培養液吹散重懸細胞。

一種利用上述高效分離脂肪源前體細胞方法所獲得的脂肪源前體細胞，該脂肪源前體細胞可用于組織修復，如皮膚組織等。

本發明的有益效果：可從人體皮下中，高效分離獲得高純度和高活性的脂肪源前體細胞，分離獲得的脂肪源前體細胞培養液，具備較高濃度的不同類型的細胞營養因子，所獲得的脂肪源前體細胞及其產物可以用于組織修復。

具體實施方式

為了使本發明所解決的技術問題、技術方案更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用于解釋本發明，并不用于限定本發明。