[發明專利]一種促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法

在審

• 申請號: 202010974672.8
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112011506A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 霍亞如;黃金剛
• 申請（專利權）人: 鄭州佐爵生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 鄭州芝麻繪智知識產權代理事務所(普通合伙) 41191
• 代理人: 李玲玲

1.一種促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，包括在骨髓間充質干細胞原代培養的基礎培養基中添加猴菇多糖、接骨木黃酮、石榴多酚，以培養基的終體積計，所述猴菇多糖的添加濃度為20-35μg/mL，所述接骨木黃酮的添加濃度為50-70μg/mL，所述石榴多酚的添加濃度為65-80μg/mL。

2.根據權利要求1所述促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取分離人骨髓間充質干細胞，以1-2×10⁴個/mL在基礎培養基中接種后進行原代培養，所述基礎培養基中加入猴菇多糖、接骨木黃酮、石榴多酚、胎牛血清，以培養基的終體積計，所述猴菇多糖的添加濃度為20-35μg/mL，所述接骨木黃酮的添加濃度為50-70μg/mL，所述石榴多酚的添加濃度為65-80μg/mL，所述胎牛血清的用量為培養基終體積的5-10％，在37℃、5％CO₂的條件下培養，每2-3天更換培養基，至細胞融合度達到80％-85％，用胰酶消化傳代；

(2)取上述步驟(1)中胰酶消化后的細胞以1-2×10⁵個/mL接種于完全培養基中，進行傳代培養，傳代培養過程在37℃、5％CO₂的條件下進行，每隔3d全量換培養液。

3.根據權利要求1所述促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，所述傳代培養的比例為1:3-4。

4.根據權利要求2所述促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基。

5.根據權利要求2所述促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，所述完全培養基包括基礎培養基DMEM/F12、添加在基礎培養基中的胎牛血清、所述胎牛血清的用量為完全培養基總體積的5-10％，以完全培養基的終體積計，所述基礎培養基中還添加有胰島素60-80ng/mL、人血清白蛋白40-50μg/mL、EGF10-20ng/mL、青霉素80-100U/mL，鏈霉素80-100U/mL。

6.根據權利要求2所述促進骨髓間充質干細胞體外增殖的方法，其特征在于，所述步驟(1)中采用濃度為0.25％的胰酶消化骨髓間充質干細胞。