[發明專利]一種蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法在審
| 申請號： | 202010973714.6 | 申請日： | 2020-09-16 |
| 公開（公告）號： | CN111893150A | 公開（公告）日： | 2020-11-06 |
| 發明（設計）人： | 季學猛;王碩 | 申請（專利權）人： | 南開大學 |
| 主分類號： | C12P19/04 | 分類號： | C12P19/04;C08B37/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津合正知識產權代理有限公司 12229 | 代理人： | 王雨杰;張艷梅 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蔗糖 誘導 細菌 固態 發酵 生產 可拉 純化 方法 | ||
1.一種蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：包括如下步驟：
步驟一：將具有可拉酸合成基因的變形菌門細菌作為生產菌種放入培養基中進行固態培養，培養基中加入蔗糖，并收集菌體與分泌物；
步驟二：刮取固體上培養的菌體與分泌物并溶于水；
步驟三：將容有菌體和分泌物的水煮沸后離心沉淀菌體，棄去沉淀，保留上清液；
步驟四：在步驟三得到的上清液中加入冰醋酸離心沉淀脂多糖，棄去沉淀，保留上清液；
步驟五：將步驟四得到的上清液離心純化真空干燥后得到可拉酸固體。
2.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟一中培養基中蔗糖的濃度為0.05-0.30g/mL。
3.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟三中的冰醋酸的添加量為0.05％-0.15％(v/v)。
4.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟五中使用15KD超濾離心管或者15KD透析膜對步驟四得到的上清液進行離心純化。
5.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟一具體包括如下步驟：
a、將蔗糖加入LB培養基，并對培養基進行高壓蒸汽滅菌，滅菌后待培養基降溫至60℃倒入平板，平板內培養基凝固后放入4℃冰箱待用；
b、將生產菌種在LB培養基中震蕩培養過夜，然后離心沉淀并用PBS反復清洗菌體，最后用PBS重新垂懸菌體，將菌懸液接種于LB固體平板并用涂布棒涂勻。
6.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟五具體包括如下步驟：
(1)利用旋轉蒸發儀器減少步驟四得到的上清液水分，再利用真空干燥得到可拉酸粗品；
(2)將可拉酸粗品干燥物復溶于水，使用15KD超濾管3500g離心力離心進一步純化樣品；
(3)純化后的可拉酸樣品再次真空干燥得到可拉酸固體。
7.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：具有可拉酸合成基因的變形菌門細菌為阪崎腸桿菌ATCC BAA-894。
8.根據權利要求1所述的蔗糖誘導細菌固態發酵生產可拉酸及純化方法，其特征在于：所述步驟一中的培養基是基礎培養基或者營養培養基。
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