[發明專利]一種牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態的快速診斷試紙

在審

• 申請號: 202010972037.6
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112098658A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 唐小千;戰文斌;龔嬌嬌;繩秀珍;邢婧;遲恒
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸

本發明公開了一種牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態的快速診斷試紙，包括載體板、樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述樣品墊和吸水墊位于所述載體板的兩端，所述硝酸纖維素膜位于所述載體板的中部；所述樣品墊與硝酸纖維素膜交界處設有載有金標鼠抗牙鲆免疫球蛋白單克隆抗體的金標墊，所述金標墊一端邊緣重疊在樣品墊之下，另一端邊緣重疊在硝酸纖維素膜之上；所述硝酸纖維素膜上設有依次排列的兩條檢測線T2、T1和一條質控線C，所述質控線C靠近吸水墊；所述檢測線T1包被重組純化的NV蛋白，所述檢測線T2包被重組純化的M蛋白，所述質控線C包被羊抗小鼠IgG。本發明具有快速、簡便、成本低、特異性強、具可重復性的優點，適用于牙鲆養殖過程中牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態的檢測與鑒別。

技術領域

本發明涉及一種診斷試紙條及其制備方法，特別涉及一種對牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態快速診斷試紙及其制備方法，屬于免疫學、微生物學及診斷試劑交叉技術領域。

背景技術

牙鲆彈狀病毒（Hiramenovirhabdovirus， HIRRV）是一種具有囊膜不分段的單股負鏈RNA病毒，同時引起牙鲆疾病的主要病毒，所引起的牙鲆彈狀病毒病具有傳播性強，病程短，致死率高的特點，是牙鲆養殖過程中最常見的疾病之一，成為牙鲆養殖業發展的重大障礙，給全球的牙鲆養殖業造成了嚴重的經濟損失。對牙鲆彈狀病毒進行快速的診斷、盡早的控制病原的傳播、進行有效的疫苗免疫是有效防控該病的關鍵。

HIRRV的基因組全長約為11000 bp，含有6個開放閱讀框 (Open Reading Frame，ORFs)，從3’端到5’端依次編碼核蛋白(Nucleoprotein，N)、磷蛋白（Phosphoprotein，P）、基質蛋白（Matrix protein，M）、糖蛋白（Glycoprotein，G）、依賴RNA的RNA 聚合酶（RNApolymerase protein，L）和非結構蛋白（Non-virion protein，NV）。其中M蛋白在囊膜的最內層且含量最高，易于抗M蛋白抗體識別并結合。然而，目前對病毒非結構蛋白（Non-virionprotein，NV）在病毒感染情況下以及在成熟病毒粒子中的表達特性仍不清楚。

目前針對HIRRV的檢測方法主要有細胞培養分離病毒法、組織病理切片法、電鏡觀察法）、聚合酶鏈式反應（PCR）、實時定量PCR、環介導等溫擴增技術（LAMP）以及酶聯免疫反應（ELISA）等。以上檢測方法有各自的優點并且均能有效、準確的檢測牙鲆彈狀病毒，但是它們都受限于需要專業的設備和復雜的操作技術，難以在生產養殖現場實現快速檢測。并且這些方法不能應用于親魚疾病的檢測，因為需要將魚殺死進行取樣完成檢測。

公開號為CN 111537729 A的中國專利申請公開了一種牙鲆彈狀病毒病快速診斷試紙及其制備方法，適用于牙鲆養殖現場對牙鲆彈狀病毒的快速診斷。但其僅能利用魚體病毒靶器官檢測牙鲆彈狀病毒的有無，而無法通過牙鲆的血清樣品檢測魚體是處于病毒感染態還是免疫態。

因此，亟需建立一種能應用于養殖生產現場的快速、準確、靈敏的檢測方法，而且對該疾病感染狀態進行檢測。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種快速、簡便、特異性強、靈敏度高的牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態快速診斷試紙，用于牙鲆養殖現場對牙鲆彈狀病毒的快速診斷，其檢測結果肉眼可見，不需要專業儀器設備和復雜的操作技術。

本發明的另一個目的是提供一種上述牙鲆彈狀病毒病感染態與免疫態快速診斷試紙的制備方法。