[發明專利]一種具有降血糖功能的茶樹菇多糖的富集純化方法和應用

有效

• 申請號: 202010969681.8
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112079940B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 羅麗平;楊玲;李冰晶;趙景芳;陸剛;何歐
• 申請（專利權）人: 貴州省生物研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P3/10
• 代理公司: 貴州派騰知識產權代理有限公司 52114
• 代理人: 周黎亞

1.一種具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖的富集純化方法，其特征在于：從新鮮的茶樹菇中提取得粗多糖，然后對粗多糖依次進行大孔樹脂柱富集純化、ODS樹脂富集純化、DEAE-cellulose DE-52柱富集純化，具體包括以下步驟；

(1)樣品預處理：將新鮮茶樹菇置于烘箱中烘干，然后送入粉碎機粉碎并過篩，得到茶樹菇粉末；

(2)多糖提取：將步驟(1)的茶樹菇粉末置于反應裝置中，向反應裝置中加入蒸餾水，常溫浸泡，然后水浴鍋回流提取，過濾，向濾渣中加入蒸餾水再反復提取2次，合并濾液，得到多糖提取液；

(3)醇沉：將步驟(2)的多糖提取液抽濾減壓濃縮至浸膏狀，用蒸餾水將浸膏完全溶解成粗提物溶液，向溶解液中加入無水乙醇，邊加邊攪拌，靜置過夜，過濾除去上清液，收集沉淀，用無水乙醇重復洗滌2次，經真空冷凍干燥，得到粗多糖；

(4)富集純化：將步驟(3)中得到的粗多糖用蒸餾水溶解成溶液，經大孔樹脂柱純化得到蒸餾水流分Fr-A，經ODS樹脂純化得到蒸餾水流分Fr-B，經DEAE-cellulose DE-52柱純化后得到Fr-B1、Fr-B2、Fr-B3、Fr-B4，制得所述茶樹菇混合多糖；

所述大孔樹脂柱純化是：選用AB-8型大孔樹脂柱層析，粗多糖與樹脂按照質量比＝1:29～31濕法上柱，靜置吸附55～65min，先用蒸餾水進行洗脫，再采用苯酚-硫酸法進行多糖追蹤檢測，直至無糖組分流出，然后用質量分數為10％、30％、50％、70％的乙醇進行洗脫，洗脫流速為1.9～2.1mL/h，將蒸餾水洗脫液進行減壓濃縮后并真空冷凍干燥成粉末，得到大孔樹脂柱純化物；

所述ODS樹脂純化是：稱取大孔樹脂柱純化好的干燥粉末溶于蒸餾水中形成溶液，Fr-A與樹脂按照質量比＝1:49～51濕法上柱，通過ODS樹脂柱充分吸附55～65min后，先用蒸餾水進行洗脫，再采用苯酚-硫酸法進行多糖追蹤檢測，直至無糖組分流出，然后用質量分數為20％、40％、60％乙醇進行洗脫，洗脫流速為1.9～2.1mL/h，收集蒸餾水洗脫液，經過減壓濃縮后并真空冷凍干燥成粉末，得到ODS樹脂純化物；

所述DEAE-celluloseDE-52柱純化是：稱取ODS樹脂純化好的干燥粉末溶于蒸餾水中形成溶液，濕法上樣于DEAE-cellulose DE-52柱，依次用蒸餾水、0.1M、0.3M、0.5M的NaCl溶液進行梯度洗脫，流速1.9～2.1mL/h，分別收集各流分，利用苯酚-硫酸法跟蹤檢測洗脫液，直至無糖分組流出，將各流分分別用蒸餾水進行透析，透析袋內液減壓濃縮，并分別真空冷凍干燥，得到Fr-B1、Fr-B2、Fr-B3、Fr-B4，將Fr-B1、Fr-B2、Fr-B3、Fr-B4按照質量比＝1:1:1:1混合，得到所述茶樹菇混合多糖。

2.根據權利要求1所述的一種具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖的富集純化方法，其特征在于：步驟(1)中，所述烘干的溫度為50～53℃，粉碎時間為2～3min，所述過篩是過50～70目篩子。

3.根據權利要求1所述的一種具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖的富集純化方法，其特征在于：步驟(2)中，所述茶樹菇粉末與蒸餾水的料液比＝1:19～21，浸泡時間為28～33min，提取溫度為98～103℃，提取時間115～125min。

4.根據權利要求1所述的一種具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖的富集純化方法，其特征在于：步驟(3)中，邊加無水乙醇邊攪拌至乙醇的濃度為85％，靜置時間為11.5～13h、溫度為4℃。

5.根據權利要求1所述的一種具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖的富集純化方法，其特征在于：所述減壓濃縮的溫度為48～53℃，冷凍干燥的溫度為-55～-50℃，真空度為0～100Pa。

6.一種如權利要求1～5任一項所述的富集純化方法制得的具有降血糖功能的茶樹菇混合多糖在制備具有降血糖作用的藥物、保健品中的應用。