[發明專利]一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010969112.3
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112213489A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 邢金松;李浩
• 申請（專利權）人: 上海熙華檢測技術服務有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/58;G01N33/545;G01N33/543
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

本發明涉及阿達木單抗含量檢測技術領域，尤其為一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，儀器和材料：EDTA血漿或血清、hTNF抗原、養抗人IgG(H+L)?HRP、苯乙烯96孔板、阿達木單抗發酵液、空白細胞株發酵液、輔助溶液，通過該方法用相應的抗原進行包被，如檢測阿達木單抗，則選擇hTNF抗原作為包被抗原，從而具有很高的特異性，同時通過比較免疫學方法和理化方法測定的蛋白含量，還可以獲得總蛋白中具有特異性結合活性的蛋白所占比例的相關信息，但是該法測定單抗制品中單抗含量的過程中，需對標準品的含量和活性精確標定，該方法易于操作，方法的準確性和精密度良好，可以用于阿達木單抗的含量測定，為該重組單克隆抗體的快速定量檢驗提供了方法學依據。

技術領域

本發明涉及阿達木單抗含量檢測技術領域，尤其涉及一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法。

背景技術

阿達木單抗(修美樂)是一種可自我注射的生物治療藥物，它先后在國家食品藥品監督管理總局(CFDA)獲批了2個適應癥，分別是類風濕關節炎、強直性脊柱炎。

2013年，通過對近12年的阿達木單抗用于各種適應證的臨床試驗中的不良事件進行研究，并未發現新的、超越以往經驗的不良反應安全信號。阿達木單抗治療的患者中，總的惡性腫瘤發病率與普通人群的預期相同。該藥物一般單獨或者與甲氨蝶呤合并使用。

為了能夠更好對人血漿中阿達木單抗含量進行檢測，因此提出一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，包括以下步驟：

S1，儀器和材料：EDTA血漿或血清、hTNF抗原、養抗人IgG(H+L)-HRP、苯乙烯96孔板、阿達木單抗發酵液、空白細胞株發酵液、輔助溶液；

S2，試劑配置：將阿達木單抗注射液稀釋至1ng/ml，之后再對倍系列稀釋到所需濃度；

S3，含量檢測：用PH9.6的包被緩沖液稀釋hTNF抗原后包被苯乙烯96孔板，4℃過夜，洗板3次，拍干，加入封閉液200μL/孔，室溫封閉2h，洗板3次，拍干，加入不同濃度的標準品或待測樣品100μL，37℃孵育1h，洗板6次，拍干，加檢測抗體1:10000,100μL/孔，室溫孵育1h，洗板6次，拍干，加TMB顯色液100μL/孔，室溫孵育15min，加終止液100μL/孔，測定OD450值；

S4，用0.5μg/ml的hTNF抗原包被酶標板,將阿達木單抗注射液稀釋至8.0ng/ml,然后進行倍比稀釋,共16個濃度梯度,每一稀釋度設3個平行孔,分別加入酶標板,加酶標檢測抗體羊抗人IgG-HRP,顯色,檢測OD450值；

S5，包被濃度與酶標抗體濃度的優化用包被緩沖液將包被抗原hTF稀釋至100、50、20ng/ml三個濃度各包被3條標準曲線試驗所用的酶標孔，用抗體稀釋液將檢測抗體羊抗人IgG-hrP稀釋至1:5000、1:10000、1:15000三個濃度,每個濃度的檢測抗體分別加入到1000、20ng/ml三個濃度的hTNF包被的酶標板上,檢測得到OD450值；

S6，準確度檢測：配制高、中、低三個濃度的阿達木單抗溶液,分別加入到空白細胞株發酵液中,在次實驗中每個濃度點測5孔,計算平均回收率；

S7，精密度檢測：配制高、中、低三個濃度的阿達木單抗溶液,在一次實驗中每個濃度點測5孔計算批內變異系數，連續測5批次,計算批間變異系數。

優選的，所述S1EDTA血漿或血清樣本可在室溫(18-25℃)保存1天，在-20℃保存1個月。