[發明專利]一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010969112.3
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112213489A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 邢金松;李浩
• 申請（專利權）人: 上海熙華檢測技術服務有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/58;G01N33/545;G01N33/543
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

1.一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，儀器和材料：EDTA血漿或血清、hTNF抗原、養抗人IgG(H+L)-HRP、苯乙烯96孔板、阿達木單抗發酵液、空白細胞株發酵液、輔助溶液；

S2，試劑配置：將阿達木單抗注射液稀釋至1ng/ml，之后再對倍系列稀釋到所需濃度；

S3，含量檢測：用PH9.6的包被緩沖液稀釋hTNF抗原后包被苯乙烯96孔板，4℃過夜，洗板3次，拍干，加入封閉液200μL/孔，室溫封閉2h，洗板3次，拍干，加入不同濃度的標準品或待測樣品100μL，37℃孵育1h，洗板6次，拍干，加檢測抗體1:10000,100μL/孔，室溫孵育1h，洗板6次，拍干，加TMB顯色液100μL/孔，室溫孵育15min，加終止液100μL/孔，測定OD₄₅₀值；

S4，用0.5μg/ml的hTNF抗原包被酶標板,將阿達木單抗注射液稀釋至8.0ng/ml,然后進行倍比稀釋,共16個濃度梯度,每一稀釋度設3個平行孔,分別加入酶標板,加酶標檢測抗體羊抗人IgG-HRP,顯色,檢測OD₄₅₀值；

S5，包被濃度與酶標抗體濃度的優化用包被緩沖液將包被抗原hTF稀釋至100、50、20ng/ml三個濃度各包被3條標準曲線試驗所用的酶標孔，用抗體稀釋液將檢測抗體羊抗人IgG-hrP稀釋至1:5000、1:10000、1:15000三個濃度,每個濃度的檢測抗體分別加入到1000、20ng/ml三個濃度的hTNF包被的酶標板上,檢測得到OD₄₅₀值；

S6，準確度檢測：配制高、中、低三個濃度的阿達木單抗溶液,分別加入到空白細胞株發酵液中,在次實驗中每個濃度點測5孔,計算平均回收率；

S7，精密度檢測：配制高、中、低三個濃度的阿達木單抗溶液,在一次實驗中每個濃度點測5孔計算批內變異系數，連續測5批次,計算批間變異系數。

2.根據權利要求1所述的一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，其特征在于，所述S1EDTA血漿或血清樣本可在室溫(18-25℃)保存1天，在-20℃保存1個月。

3.根據權利要求1所述的一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，其特征在于，所述S6阿達木單抗溶液配制高(0.80ng/ml)、中(0.20ng/ml)、低(0.02ng/ml)三個濃度。

4.根據權利要求1所述的一種人血漿中阿達木單抗含量的檢測方法，其特征在于，所述S7阿達木單抗溶液配制高(0.80ng/ml)、中(0.20ng/ml)、低(0.02ng/ml)三個濃度。