[發明專利]多重定量電化學免疫傳感器及其構建方法

有效

• 申請號: 202010967295.5
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112305041B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 尹珍珍;劉仁源;章朦;周侗
• 申請（專利權）人: 東莞東陽光醫療智能器件研發有限公司
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/49;G01N1/40;G01N33/68;G01N33/53
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本發明屬于電化學免疫傳感領域，公開一種多重定量電化學免疫傳感器及其構建方法，傳感器包括檢測探針，檢測探針表面設置有：自組裝分子層，與所述檢測探針表面連接；捕捉抗體，與所述自組裝分子層連接，用于捕捉總目標物蛋白所述總目標物蛋白包括磷酸化目標物蛋白和未磷酸化目標物蛋白；功能化電化學標記物，連接所述磷酸化目標物蛋白，用于在電化學測量時放大信號。本發明的多重定量電化學免疫傳感器能夠在一個樣品溶液中同時捕獲包含磷酸化目標物蛋白和未磷酸化目標物蛋白的總目標物蛋白；再通過功能化電化學標記物特異性捕獲并定量檢測磷酸化目標物蛋白，從而得到蛋白質磷酸化的水平程度。

技術領域

本發明涉及電化學免疫傳感領域，特別是涉及一種多重定量電化學免疫傳感器及其構建方法。

背景技術

磷酸化普遍存在于蛋白質翻譯后修飾過程中，對生命體進行調節，而相關蛋白質的磷酸化水平異常將會導致相應疾病的發生和發展，因此開發相關的磷酸化蛋白水平檢測技術手段極為重要，對臨床的診斷，治療和病理學研究具有重大意義。

現有對磷酸化蛋白的檢測手段中，已經開發了酶聯免疫吸附測定，以及質譜法等技術手段，但這些方法需要特殊位點特異性的磷酸化蛋白抗體，檢測前需要進行磷酸化蛋白富集，只能單獨檢測磷酸化蛋白的含量，且具有檢測需要大量蛋白質、耗時、昂貴等缺點。

因此，有必要的對磷酸化蛋白的檢測方法進行改進。

發明內容

本發明提出一種多重定量電化學免疫傳感器及其構建方法，兩種形式目標物蛋白(磷酸化和未磷酸化目標物蛋白)同時從一個樣品溶液中捕獲，不需要對磷酸化目標物蛋白進行預富集，實現總目標物蛋白含量和磷酸化目標物蛋白含量同步定量檢測，得到磷酸化目標物蛋白和總目標物蛋白含量的比值，即蛋白質磷酸化的水平程度。

為此，本發明的一個目的在于提出一種多重定量電化學免疫傳感器，包括檢測探針，檢測探針表面設置有：

自組裝分子層，與所述檢測探針表面連接；

捕捉抗體，與所述自組裝分子層連接，用于捕捉總目標物蛋白，所述總目標物蛋白包括磷酸化目標物蛋白和未磷酸化目標物蛋白；

功能化電化學標記物，連接所述磷酸化目標物蛋白，用于在電化學測量時放大信號。

進一步的，所述功能化電化學標記物為辣根過氧化物酶/二氧化鈦/多壁碳納米管。

進一步的，所述自組裝分子層為在檢測探針表面修飾形成的MPA自組裝分子層，所述自組裝分子層經過羧氨反應修飾上所述捕捉抗體。

進一步的，所述自組裝分子層還通過羧基封閉劑將未連接捕捉抗體的位點進行封閉，避免非特異性吸附。優選的，所述羧基封閉劑為EA。

進一步的，所述檢測探針為金電極。

本發明的另一個目的在于提出一種多重定量電化學免疫傳感器的構建方法，包括步驟：

S1：制備自組裝分子層

將檢測探針浸入含有自組裝分子的有機溶劑中，獲得與檢測探針表面連接的自組裝分子層；

S2：連接捕捉抗體

將自組裝分子層活化，再將活化后的自組裝分子層在含有捕捉抗體的溶液中反應，使捕捉抗體與自組裝分子層連接；

S3：總目標物蛋白的EIS檢測

將含有總目標物蛋白的溶液覆蓋連接了捕捉抗體的檢測探針，反應，使總目標物蛋白與捕捉抗體特異性結合，進行EIS測量，得到總目標物蛋白的阻抗值；

S4：連接功能化電化學標記物