[發(fā)明專利]多重定量電化學(xué)免疫傳感器及其構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010967295.5
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112305041B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹珍珍;劉仁源;章朦;周侗
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞東陽光醫(yī)療智能器件研發(fā)有限公司
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/49;G01N1/40;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種多重定量電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，包括檢測探針，所述檢測探針表面設(shè)置有：

自組裝分子層，與所述檢測探針表面連接，所述自組裝分子層為在檢測探針表面修飾形成的MPA自組裝分子層，所述自組裝分子層經(jīng)過羧氨反應(yīng)修飾上捕捉抗體；

捕捉抗體，與所述自組裝分子層連接，用于捕捉總目標(biāo)物蛋白，所述總目標(biāo)物蛋白包括磷酸化目標(biāo)物蛋白和未磷酸化目標(biāo)物蛋白；

功能化電化學(xué)標(biāo)記物，連接所述磷酸化目標(biāo)物蛋白，用于在電化學(xué)測量時放大信號，所述功能化電化學(xué)標(biāo)記物為辣根過氧化物酶/二氧化鈦/多壁碳納米管。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述自組裝分子層還通過羧基封閉劑將未連接所述捕捉抗體的位點進(jìn)行封閉。

3.一種權(quán)利要求1-2任一項所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，包括步驟：

S1：制備自組裝分子層

將檢測探針浸入含有自組裝分子的有機(jī)溶劑中，獲得與檢測探針表面固定的自組裝分子層；

S2：連接捕捉抗體

將自組裝分子層活化，再將活化后的自組裝分子層在含有捕捉抗體的溶液中反應(yīng)，使捕捉抗體與自組裝分子層連接；

S3：總目標(biāo)物蛋白的 EIS 檢測

將含有總目標(biāo)物蛋白的溶液覆蓋連接了捕捉抗體的檢測探針，反應(yīng)，使總目標(biāo)物蛋白與捕捉抗體特異性結(jié)合，進(jìn)行EIS測量，得到總目標(biāo)物蛋白的阻抗值；

S4：連接功能化電化學(xué)標(biāo)記物

將修飾了總目標(biāo)物蛋白的檢測探針浸入含有功能化電化學(xué)標(biāo)記物的溶液中進(jìn)行螯合反應(yīng)，使功能化電化學(xué)標(biāo)記物與磷酸化目標(biāo)物蛋白連接，使用電化學(xué)測試單元進(jìn)行磷酸化目標(biāo)物蛋白的電化學(xué)測量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，所述自組裝分子層為MPA自組裝分子層，制備所述MPA自組裝分子層的步驟包括：將清潔后的檢測探針在室溫下浸入含有4-8 mM MPA的乙醇溶液中10-15 h，獲得與檢測探針表面連接的MPA自組裝分子層。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，所述自組裝分子層為MPA自組裝分子層，所述將自組裝分子層活化是通過EDC和NHS的混合溶液將MPA的羧基活化。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，在步驟S2中，完成捕捉抗體與自組裝分子層連接后，還包括使用羧基封閉劑將已活化但未連接捕捉抗體的羧基位點進(jìn)行封閉。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，在步驟S2中完成羧基封閉后，先進(jìn)行第一次EIS測量，得到初始的阻抗值，在步驟S3中，進(jìn)行第二次EIS測量，得到總目標(biāo)物蛋白的阻抗值；將兩次EIS測量得到的阻抗值進(jìn)行歸一化處理，得出總目標(biāo)物蛋白的含量。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多重定量電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于，所述功能化電化學(xué)標(biāo)記物為HRP/TiO₂/ MWCNTs，其制備步驟包括：

（1）制備二氧化碳溶膠溶液，將碳納米管與二氧化碳溶膠溶液混合，獲得TiO₂ /MWNTs納米復(fù)合材料；

（2）將TiO₂ /MWNTs納米復(fù)合材料在酸液中處理，使表面形成羧基官能團(tuán)；

（3）將TiO₂ /MWNTs納米復(fù)合材料進(jìn)行活化；

（4）將HRP加入活化后的TiO₂ /MWNTs納米復(fù)合材料中反應(yīng)，得到HRP/TiO₂/ MWCNTs納米材料。