[發(fā)明專利]一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN114184791A
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宏俊;梅晨;胡偉;張雪
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/531
• 代理公司: 北京智為時(shí)代知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發(fā)明提供了一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條及其制備方法，試紙條包括由樣品墊、膠體金結(jié)合墊、C/T線的承載體和吸水墊依次搭接并貼在底板上，膠體金結(jié)合墊包被有膠體金標(biāo)記兔抗雞IgG蛋白，C/T線的承載體為包被有羊抗兔IgG作為質(zhì)控線和包被副雞禽桿菌外膜蛋白P9為檢測線。試紙條在副雞禽桿菌標(biāo)準(zhǔn)免疫血清稀釋至1000倍時(shí)仍可檢測，且與雞新城疫、禽流感、雞支原體、雞大腸桿菌病的陽性血清均無交叉反應(yīng)；有較好的穩(wěn)定性，整個(gè)檢測過程可在10min內(nèi)完成，具有簡便、快捷、實(shí)用、靈敏、高效的有益效果，可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

副雞禽桿菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是雞傳染性鼻炎(infectiouscoryza,IC)的病原菌，該病在我國各省市的養(yǎng)雞場均有發(fā)生，是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要細(xì)菌性傳染病。它會(huì)造成蛋雞產(chǎn)蛋量顯著下降，下降率達(dá)10％-40％，也會(huì)導(dǎo)致育成雞生長發(fā)育受阻和淘汰率增加。副雞禽桿菌感染的是呼吸系統(tǒng)中最前沿的部位--鼻道和鼻竇黏膜，是呼吸道疾病的門戶病，第一屏障受到損害，其他病原的感染率就大大增加。若與其它病原如雞傳染性支氣管炎病毒、雞支原體、新城疫病毒等并發(fā)感染后會(huì)引起雞呼吸道疾病綜合征，會(huì)使癥狀加重、病程延長和死亡率增加。肉雞發(fā)生雞傳染性鼻炎病時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重的肉質(zhì)下降，胴體淘汰率增加。該病嚴(yán)重威脅著養(yǎng)雞生產(chǎn)，因此建立快速檢測副雞禽桿菌病診斷方法具有非常重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

膠體金免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)末發(fā)展起來的一種新型體外診斷技術(shù)，其特點(diǎn)突出，如操作簡便、檢測迅速、特異性強(qiáng)等，成為快速檢測藥物殘留、傳染病、早孕等的首選。膠體金標(biāo)記由于標(biāo)記物制備簡便，方法敏感、特異，不需要輔助儀器和試劑且操作人員不用進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)，方便于廣大基層檢驗(yàn)人員，檢測結(jié)果判斷清楚直觀，用時(shí)短，可對大批量樣品進(jìn)行現(xiàn)場檢測和大面積普查等。但是由于抗原的選擇是決定檢測效率的關(guān)鍵，選擇有免疫原性、特異性強(qiáng)的抗原，對于檢測結(jié)果陽性與準(zhǔn)確性起決定性作用。

目前，在獸醫(yī)臨床實(shí)踐中，對于檢測副雞禽桿菌抗體的膠體金免疫層析試紙條未有報(bào)道。隨著集約化養(yǎng)殖的快速發(fā)展，該病的發(fā)生和流行呈上升趨勢，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，必須對該病予以高度重視，加強(qiáng)對該病的防控，如何快速準(zhǔn)確地檢測副雞禽桿菌抗體，是實(shí)際工作中急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條及其制備方法與應(yīng)用。該試紙適用于檢測副雞禽桿菌抗體，制備過程經(jīng)過多種條件的優(yōu)化，能在10min內(nèi)完成樣品檢測，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好、易攜帶、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案為：

一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條，其包括由樣品墊、膠體金結(jié)合墊、C/T線的承載體和吸水墊依次搭接并貼在底板上，所述膠體金結(jié)合墊包被有膠體金標(biāo)記的兔抗雞IgG蛋白，所述C/T線的承載體為包被有羊抗兔IgG作為質(zhì)控線和包被副雞禽桿菌外膜蛋白P9為檢測線。

如上所述的膠體金試紙條，優(yōu)選地，所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

如上所述的膠體金試紙條，優(yōu)選地，所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的表達(dá)采用的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

如上所述的膠體金試紙條，優(yōu)選地，所述膠體金結(jié)合墊使用的材料為玻璃纖維膜，優(yōu)選為Gls-17930，所述C/T線的承載體使用的材料為硝酸纖維素膜(Nitrocellulosefilter membrane,NC膜)，優(yōu)選為Millipore Hi Flow-135，所述底板為PVC板。