[發明專利]一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202010967232.X
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN114184791A
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 王宏俊;梅晨;胡偉;張雪
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/531
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

1.一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條，其特征在于，其包括由樣品墊、膠體金結合墊、C/T線的承載體和吸水墊依次搭接并貼在底板上，所述膠體金結合墊包被有膠體金標記兔抗雞IgG蛋白，所述C/T線的承載體為包被有羊抗兔IgG作為質控線和包被副雞禽桿菌外膜蛋白P9為檢測線。

2.根據權利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根據權利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的表達采用的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根據權利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述膠體金結合墊使用的材料為玻璃纖維膜，所述C/T線的承載體使用的材料為硝酸纖維素膜，所述底板為PVC板。

5.根據權利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述膠體金的粒徑為10～50nm，膠體金標記時的pH值為7.0～10.0，兔抗雞IgG蛋白的標金量為6μg/mL～18μg/mL；所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的包被濃度為0.5～2mg/mL；所述羊抗兔IgG的抗體的包被濃度為0.5～2mg/mL。

6.一種檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

S1、在膠體金溶液加入K₂CO₃溶液調節pH值，加入兔抗雞IgG蛋白攪拌進行標記，獲得膠體金標記兔抗雞IgG；

S2、將膠體金標記兔抗雞IgG噴涂在玻璃纖維膜上，烘干，獲得膠體金結合墊；

S3、C/T線的承載體上設有質控線和檢測線，質控線上包被羊抗兔IgG，檢測線上包被副雞禽桿菌外膜蛋白P9，烘干，獲得包被墊；

所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；

S4、將樣品墊、膠體金結合墊、C/T線的承載體和吸水墊依次沿長度方向貼于底板PVC板上，再切割成寬0.3～0.5cm/條，即獲得檢測副雞禽桿菌抗體的膠體金免疫層析試紙條。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟S1中，所述膠體金的粒徑為10～50nm，pH值為7.0-10.0，加入兔抗雞IgG蛋白的量按6μg/mL-18μg/mL進行。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟S2中，膠體金標記兔抗雞IgG在玻璃纖維膜的噴涂量為1.2μL/cm。

9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟S3中，所述羊抗兔IgG的濃度為0.5～2mg/mL，所述副雞禽桿菌外膜蛋白P9的濃度為0.5～2mg/mL，在C/T線的承載體的包被量均為1.2μL/cm。

10.權利要求1-5中任一項所述的檢測副雞禽桿菌外膜蛋白抗體的膠體金試紙條在檢測副雞禽桿菌抗體中的應用。