[發明專利]一種慢病毒載體純化方法

有效

• 申請號: 202010967219.4
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN114181970B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 趙云燦;羅易坤;曹元元;高海
• 申請（專利權）人: 上海藥明巨諾生物醫藥研發有限公司;上海藥明巨諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/02
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及病毒載體純化技術領域，提供一種慢病毒載體純化方法：包括以下步驟，1)，將慢病毒收獲液進行過濾和核酸酶孵育，得到慢病毒載體澄清收獲液；2)，對所述慢病毒載體澄清收獲液采用陰離子交換層析和/或復合模式層析處理，獲得純化的慢病毒載體樣品。本發明提供的一種慢病毒載體純化方法，慢病毒載體收獲率高，細胞宿主蛋白、宿主DNA、殘余質粒等雜質殘留低，安全性好，適合大規模生產制備，并且滿足臨床上細胞治療和基因治療的使用要求。

技術領域

本發明涉及病毒載體純化技術領域，特別是涉及一種慢病毒載體純化方法。

背景技術

近年來，以嵌合抗原受體修飾T細胞(CAR-T)為代表的細胞治療和以基因轉運載體為?基礎的基因治療在臨床上不斷取得突破性進展，在治療人類疾病方面得到了越來越多的應用。?其中，常用的病毒載體之一就是慢病毒載體。慢病毒載體是在HIV-1病毒基礎上改造而成的?病毒載體系統，它能高效的將目的基因導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體介導的基因表達可以用于實現連續且穩定的蛋白質生產，因為目的基因已經整合到宿主細胞的基?因組中并且在細胞分裂時被復制。另外，慢病毒載體可以有效感染非分裂細胞以及那些積極?進行細胞分裂的細胞，比其他病毒載體使用范圍更廣。

成熟的慢病毒顆粒是通過將多個質粒載體共同轉染293相關細胞后在細胞內包裝而成，?并分泌至細胞外培養上清中。實驗室一般通過超速離心進行制備高濃度慢病毒載體，該方法?雖然簡單但是無法進行工業化放大，而且制備得到的慢病毒載體可能存在較高的內毒素、?BSA、HCP或核酸等殘留，無法直接用于人體。文獻《Large-Scale?ProductionMeans?for?the?Manufacturing?of?Lentiviral?Vectors》和《New?developments?inlentiviral?vector?design,production?and?purification》里綜述了現有的用于生產慢病毒載體的層析方法主要采用Q膜層析、CIM整?體柱或分子篩等，普遍存在著生產成本高、收率較低和步驟繁瑣等缺點，難以滿足工業化大?規模生產的需要。

因此，本領域迫切需要開發高效低成本、適合大規模生產并且滿足GMP規定的慢病毒?載體純化方法。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種慢病毒載體純化方法，用于?解決現有技術中生產成本高、收率較低和步驟繁瑣等缺點的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種慢病毒載體純化方法，包括以下步驟：

1)將慢病毒收獲液進行過濾和核酸酶孵育，得到慢病毒載體澄清收獲液；

2)對所述慢病毒載體澄清收獲液采用陰離子交換層析和/或復合模式層析處理，獲得純?化的慢病毒載體樣品；

可選地，所述步驟1)中采用深層過濾膜或孔徑為0.45um-1um的死端過濾膜包過濾所述?慢病毒收獲液。

可選地，所述步驟1)中采用濃度為5U-50U/ml的核酸酶和濃度為0.8-2.0mmol/L的硫酸?鎂孵育所述慢病毒收獲液。

可選地，所述步驟2)中使用的陰離子交換層析填料的微?？讖酱笥?0nm。

可選地，所述步驟2)中，還包括以下特征中的一項或多項：

所述復合模式層析采用流穿模式；

所述復合模式層析使用Capto?core?700或Capto?core?400填料；

所述復合模式層析的上樣量為2-10CV，優選的上樣量為2-5CV。