[發(fā)明專利]一種慢病毒載體純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010967219.4 | 申請日： | 2020-09-15 |
| 公開（公告）號： | CN114181970B | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙云燦;羅易坤;曹元元;高海 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海藥明巨諾生物醫(yī)藥研發(fā)有限公司;上海藥明巨諾生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N7/02 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 許亦琳;余明偉 |
| 地址： | 201210 上海市浦東新區(qū)中國（上海）*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 病毒 載體 純化 方法 | ||
1.一種慢病毒載體純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）將慢病毒收獲液進(jìn)行過濾和核酸酶孵育，得到慢病毒載體澄清收獲液；
2）對所述慢病毒載體澄清收獲液采用陰離子交換層析，獲得純化的慢病毒載體樣品；
所述步驟2）中使用的陰離子交換層析填料的微粒孔徑為100nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述步驟1）中采用深層過濾膜或孔徑為0.45μm-1μm的死端過濾膜包過濾所述慢病毒收獲液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述步驟1）中采用濃度為5U-50U/ml的核酸酶和濃度為0.8-2.0mmol/L的硫酸鎂孵育所述慢病毒收獲液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于，所述步驟2）中包括復(fù)合模式層析處理，并且包括以下特征中的一項或多項：
所述復(fù)合模式層析采用流穿模式；
所述復(fù)合模式層析使用Capto?core?700或Capto?core?400填料；
所述復(fù)合模式層析的上樣量為2-10CV。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于，所述復(fù)合模式層析的上樣量為2-5CV。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于，所述方法還包括：步驟3），對所述慢病毒載體樣品進(jìn)行濃縮并將所述慢病毒載體樣品中的緩沖體系置換至制劑緩沖液，獲得慢病毒載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述步驟3）中，通過超濾膜包或中空纖維膜柱對所述慢病毒載體樣品進(jìn)行濃縮和將所述慢病毒載體樣品中的緩沖體系置換至制劑緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述超濾膜包和所述中空纖維膜柱的孔徑為100-1000KD。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述步驟1）至所述步驟3）采用全密閉操作的無菌生產(chǎn)環(huán)境或者當(dāng)涉及敞口操作時在潔凈等級A級區(qū)域中進(jìn)行；
所述方法還包括：對所述慢病毒載體進(jìn)行除菌過濾。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種慢病毒載體純化方法，其特征在于：所述除菌過濾使用的是雙層組合孔徑的除菌過濾器。
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