[發明專利]從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法

在審

• 申請號: 202010966193.1
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112552418A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 夏崢
• 申請（專利權）人: 淄博職業學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 淄博市眾朗知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 37316
• 代理人: 呂明哲

本發明屬于微生物技術領域，具體的涉及一種從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法。將紅曲霉發酵液抽濾除去菌絲體和不溶物，得到的濾液減壓，加入乙酸乙酯萃取，然后除去乙酸乙酯層；向得到的水層中加入粉末狀活性炭，磁力攪拌，然后抽濾除去；濾液經減壓濃縮，然后將其透析；將濃縮液倒入乙醇溶液中，于1?5℃下放置，使其沉淀；離心得沉淀部分，洗滌烘干，得多糖粗品；將多糖粗品配制成濃度為5?6％的溶液，加入Sevag溶液，漩渦震蕩，然后離心；將上層多糖溶液離心除去不溶物，減壓濃縮冷凍干燥，即得到粗多糖。本發明所述的從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法，提取的胞外多糖的收率及純度高，且不會破壞胞外多糖的活性。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體的涉及一種從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法。

背景技術

紅曲霉作為常見的絲狀真菌，廣泛分布于自然環境中，其能在26-42℃溫度范圍內生長，32-35℃之間為最適生長溫度。紅曲霉所能利用的碳源與氮源也較為常見，其可以利用常見的農副產品作為發酵基質。

紅曲霉菌具有產生胞外多糖的能力，并且該多糖是由十個以上的單糖以糖苷鍵連接而成的高分子聚合物，具有明顯的生物學活性，例如：抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、免疫調節等方面，此外，還有放射保護、保肝解毒作用等。其最重要的免疫調節活性，廣泛用于免疫缺陷疾病及腫瘤疾病的臨床治療及醫藥領域，己成為分子生物學、醫藥學的研究熱點。紅曲霉深層液體發酵的發酵液中含有大量多糖，經離心、醇沉得到的粗多糖和生物量在研究領域有著廣泛意義。

目前，對紅曲霉發酵液胞外多糖的提取回收研發較少，現有的提取方法工藝繁瑣，回收率低，因此，有必要探索一種新型的從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法。

發明內容

本發明的目的是：提供一種從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法。該提取方法得率高，設備簡單，且不會破壞多糖的活性和結構。

本發明所述的從紅曲霉發酵液中提取分離粗多糖的方法，由以下步驟組成：

(1)將紅曲霉發酵液抽濾除去菌絲體和不溶物，得到的濾液減壓濃縮為原體積的20％-30％，加入等體積的乙酸乙酯萃取，然后除去乙酸乙酯層；

(2)向得到的水層中加入粉末狀活性炭，室溫下磁力攪拌，然后抽濾除去活性炭粉末；

(3)濾液經減壓濃縮至原體積的5％-10％，然后將其透析，將透析完的保留液減壓濃縮至原體積的5％-10％，重復透析2-3次；

(4)將濃縮液倒入乙醇溶液中，邊傾倒邊攪拌使其混合均勻，于1-5℃環境下放置20-24h，使其充分沉淀；

(5)離心得沉淀部分，采用無水乙醇和丙酮分別洗滌沉淀2-3次，將最終獲得的沉淀烘干，得多糖粗品；

(6)將多糖粗品配制成濃度為5-6％的溶液，加入Sevag溶液，漩渦震蕩，然后離心，吸取上層多糖溶液重復操作至界面無白色胨狀物出現為止；

(7)將上層多糖溶液離心除去不溶物，減壓濃縮后冷凍干燥，即得到粗多糖。

其中：

步驟(1)中所述的紅曲霉發酵液的發酵條件為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，配方組成為馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂15-20克以及蒸餾水1000毫升；28℃搖床培養15天。

紅曲霉采用中國普通微生物菌種保藏管理中心，編號為CGMCC 3.15547的菌種。

其中，編號為CGMCC 3.15547的菌種，其在中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編：100101，菌種的拉丁文名稱是：Monascus purpureus。

步驟(1)中所述的采用2-3層濾紙抽濾除去菌絲體和不溶物。