[發(fā)明專利]一種提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010965818.2
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112042466B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宇;楊建衛(wèi);馮興成;孔文文;何勇;孔猛;楊守峰
• 申請（專利權(quán)）人: 山東同康農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司
• 主分類號: A01G18/00
• 分類號: A01G18/00;A01G18/20
• 代理公司: 濟(jì)寧匯景知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37254
• 代理人: 孫兆乾

1.一種提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法，其特征是包括以下步驟：

1）無菌條件下進(jìn)行銀耳菌株低溫馴化，在精確23℃中進(jìn)行培養(yǎng)，八成熟后，采用生長強(qiáng)壯的銀耳菌株進(jìn)行孢子彈射分離，分離后孢子進(jìn)行菌絲培養(yǎng)、菌株栽培，培養(yǎng)溫度改為22℃，反復(fù)篩選出能適應(yīng)在18-20℃條件下茁壯的銀耳孢子；

2）培養(yǎng)基配制：30-50%木屑，10-20%麩皮，10-20%玉米芯，10-20%銀耳多糖提取廢渣，5-10%甘蔗渣，1-5%酵母蛋白胨，1-2%石膏，1-2%磷酸氫二鉀；混合后進(jìn)行粉碎，勾兌水，使培養(yǎng)基濕度達(dá)到50-60%，混勻，裝袋；

3）進(jìn)行高溫高壓滅菌，滅菌條件：增加壓力，溫度121℃，滅菌時(shí)間2-3小時(shí)，等菌棒在接種室內(nèi)冷卻至22-26℃接種；

4）進(jìn)行拌種，潔凈區(qū)中將下層香灰菌絲和上層銀耳菌絲1∶2進(jìn)行混勻后12小時(shí)內(nèi)接種；

5）用接種勺取2-4g銀耳菌種，接種到接種穴中，將菌袋放置在無菌環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間4-8天，溫度保持在22-26℃；

6）再轉(zhuǎn)移到菌房栽培，將菌袋封口開6*6cm小孔，使菌落充分接觸空氣，控制溫度在20-24℃，濕度80-90%，培養(yǎng)5-10天；芽基分化耳芽后，控制溫度在18-22℃，濕度90-95%，栽培10-15天；

7）葉片直徑大于18cm停止噴水，保持自然濕度，增大通風(fēng)，溫度18-22℃，5-10天菌袋明顯收縮、皺褶、變輕后采摘；

8）銀耳經(jīng)過真空低壓低溫干燥后，按如下步驟提取高分子銀耳多糖：

超微粉碎：選用干凈無病害的銀耳干品，先制成粗粉后，再用超微粉碎機(jī)繼續(xù)粉碎，得到銀耳超微粉；

脫色除雜：將所得銀耳超微粉，加入70%wt~100%wt乙醇進(jìn)行浸提，過濾，除去多酚、脂肪、色素小分子雜質(zhì)，得到脫色除雜的銀耳超微粉；

低溫浸提：將所得的脫色除雜的銀耳超微粉，加入去離子水進(jìn)行低溫浸提，浸提溫度≤40℃，離心，得到冷水可溶的多糖浸提液和冷水不溶的銀耳殘?jiān)?/p>

脫蛋白質(zhì)：將所得多糖浸提液進(jìn)行濃縮，濃縮液加入sevage試劑，充分?jǐn)嚢瑁o置分層，收集上層多糖溶液；

提純精制：將所得多糖溶液加入季銨鹽溶液至絡(luò)合沉淀，沉淀物溶解于氯化鈉溶液中，除去不溶物，上清液濃縮至多糖接近飽和，經(jīng)醇沉、離心、洗滌、干燥后，得到水溶性高分子量銀耳多糖；

殘?jiān)茫簩⑺玫睦渌蝗艿你y耳殘?jiān)稍锖头鬯椋玫椒勰畹你y耳殘?jiān)蝗缓蟛捎媚z滲透色譜法(GPC)測定銀耳多糖分子量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法，其特征是步驟1）馴化后的菌株在18-20℃條件生長, 低于馴化前菌株生長環(huán)境的溫度23℃, 馴化后的菌株生長環(huán)境溫度低于馴化前菌株生長環(huán)境溫度的3-5℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法，其特征是步驟1）中馴化方法采用恒溫培養(yǎng)箱培育。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法，其特征是步驟3）中利用高壓高溫滅菌鍋進(jìn)行滅菌。

5.一種提取高分子銀耳多糖的銀耳栽培方法，其特征是包括以下步驟：

1）無菌條件下進(jìn)行銀耳菌株低溫馴化，在精確23℃中進(jìn)行培養(yǎng)，八成熟后，采用生長強(qiáng)壯的銀耳菌株進(jìn)行孢子彈射分離，分離后孢子進(jìn)行菌絲培養(yǎng)、菌株栽培，培養(yǎng)溫度改為22℃，反復(fù)篩選出能適應(yīng)在18-20℃條件下茁壯的銀耳孢子；

2）培養(yǎng)基配制：30-50%木屑，10-20%麩皮，10-20%玉米芯，10-20%銀耳多糖提取廢渣，5-10%甘蔗渣，1-5%酵母蛋白胨，1-2%石膏，1-2%磷酸氫二鉀；混合后進(jìn)行粉碎，勾兌水，使培養(yǎng)基濕度達(dá)到50-60%，混勻，裝袋；

3）進(jìn)行高溫高壓滅菌，滅菌條件：增加壓力，溫度121℃，滅菌時(shí)間2-3小時(shí)，等菌棒在接種室內(nèi)冷卻至22-26℃接種；

4）進(jìn)行拌種，潔凈區(qū)中先將銀耳接種在培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10天后，再接入少許香灰菌絲，在同樣溫度下，培養(yǎng)7～10天，待香灰菌絲蔓延全試管時(shí)拌勻即為原種；

5）用接種勺取2-4g銀耳菌種，接種到接種穴中，將菌袋放置在無菌環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間4-8天，溫度保持在22-26℃；

6）再轉(zhuǎn)移到菌房栽培，將菌袋封口開6*6cm小孔，使菌落充分接觸空氣，控制溫度在20-24℃，濕度80-90%，培養(yǎng)5-10天；芽基分化耳芽后，控制溫度在18-22℃，濕度90-95%，栽培10-15天；

7）葉片直徑大于18cm停止噴水，保持自然濕度，增大通風(fēng)，溫度18-22℃，5-10天菌袋明顯收縮、皺褶、變輕后采摘；

8）銀耳經(jīng)過真空低壓低溫干燥后，按如下步驟提取高分子銀耳多糖：

超微粉碎：選用干凈無病害的銀耳干品，先制成粗粉后，再用超微粉碎機(jī)繼續(xù)粉碎，得到銀耳超微粉；

脫色除雜：將所得銀耳超微粉，加入70%wt~100%wt乙醇進(jìn)行浸提，過濾，除去多酚、脂肪、色素小分子雜質(zhì)，得到脫色除雜的銀耳超微粉；

低溫浸提：將所得的脫色除雜的銀耳超微粉，加入去離子水進(jìn)行低溫浸提，浸提溫度≤40℃，離心，得到冷水可溶的多糖浸提液和冷水不溶的銀耳殘?jiān)?/p>

脫蛋白質(zhì)：將所得多糖浸提液進(jìn)行濃縮，濃縮液加入sevage試劑，充分?jǐn)嚢瑁o置分層，收集上層多糖溶液；

提純精制：將所得多糖溶液加入季銨鹽溶液至絡(luò)合沉淀，沉淀物溶解于氯化鈉溶液中，除去不溶物，上清液濃縮至多糖接近飽和，經(jīng)醇沉、離心、洗滌、干燥后，得到水溶性高分子量銀耳多糖；

殘?jiān)茫簩⑺玫睦渌蝗艿你y耳殘?jiān)稍锖头鬯椋玫椒勰畹你y耳殘?jiān)蝗缓蟛捎媚z滲透色譜法(GPC)測定銀耳多糖分子量。