[發明專利]一種神經干細胞向神經元分化的體外培養方法

有效

• 申請號: 202010963058.1
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN112080470B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 戴建武;崔熠;韓津
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793;C12N5/0797;C08J9/28;C08J9/36;C08L89/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

1.一種提高神經干細胞向Tuj1⁺神經元分化、減少其向星形膠質細胞分化并提高神經干細胞遷移能力的體外培養方法，其特征在于，其包括將神經干細胞置于含神經生長因子NT-3的分化培養基中并在微重力旋轉細胞培養系統中培養的步驟；

每100ml所述含神經生長因子NT-3的分化培養基由以下組分組成：非必需氨基酸0.1mM，丙酮酸鈉1mM，青鏈霉素混合液100U/ml，B27 2%，谷氨酸2 mM，葡萄糖33mM，NT-350ng/ml，以DMEM/F12補足至100ml；其中，所述非必需氨基酸為甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-脯氨酸和L-絲氨酸；

所述神經干細胞以膠原海綿為支架材料進行三維培養；

所述膠原海綿的制備方法包括如下步驟：取豬皮膚組織的內層組織置于0.5M醋酸中浸泡5h后取出進行勻漿處理；然后加入1%的胃蛋白酶，16℃處理48h；離心收集上清，上清中加入1.5M NaCl處理1h；離心收集沉淀，將沉淀置于水中采用分子量為3500的透析袋于16℃透析，將透析后的物質凍干；凍干物質于0.5M的乙酸中溶解；將pH調整至7后再凍干；加入1%戊二醛交聯3h，清洗后再次凍干。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在微重力旋轉細胞培養系統中培養的過程中，細胞貼附的材料保持懸浮狀態。

3.根據權利要求1~2任一項所述的方法，其特征在于，所述神經干細胞的接種量為1×10⁵細胞/0.19cm³膠原海綿。

4.根據權利要求1~2任一項所述的方法，其特征在于，在微重力旋轉細胞培養系統培養前，先對神經干細胞進行貼壁處理，使其粘附于膠原海綿支架材料上。