[發明專利]檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物及其應用

在審

• 申請號: 202010962630.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN111961750A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 吳志明;王鵬;李亞棟;康忱;田哲娟;王洪樂;邙光偉;楊超沙;王美娥
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院經濟作物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

1.檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物，其特征在于所述KASP引物序列包含：

正向引物Ty-1-F1：5’-TCAATGAACCTCATCTCCATGT-3’，其序列如SEQ No.1；

正向引物Ty-1-F2：5’-TCAATGAACCTCATCTCCATGC-3’,其序列如SEQ No.2；

所述正向引物Ty-1-F1和正向引物Ty-1-F2分別連接有不同的標簽序列。

2.根據權利要求1所述的檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物，其特征在于在合成KASP引物時，所述正向引物Ty-1-F1的5'端加上標簽序列A，標簽序列A為：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’，其序列如SEQ No.6；所述正向引物Ty-1-F2的5'端加上標簽序列B，標簽序列B為：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’，其序列如SEQ No.7。

3.根據權利要求2所述的檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物，其特征在于所述KASP引物序列為：

正向引物1：5’–GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCAATGAACCTCATCTCCATGT-3’，其序列如SEQNo.3；

正向引物2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCAATGAACCTCATCTCCATGC-3’，其序列如SEQNo.4。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的KASP引物，其特征在于所述KASP引物序列還包含：

反向引物：5’-TGTTCCCATAAGATAAAAACTGTCA-3’，其序列如SEQ No.5。

5.用于鑒定檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1的試劑盒，其特征在于包含權利要求1至4中任一項所述的KASP引物。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于其中還包含：

標簽序列A：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’，其序列如SEQ No.6；

標簽序列B：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’，其序列如SEQ No.7；

所述兩種標簽序列分別與不同的熒光基團相連接；所述兩種標簽序列的互補序列均與BHQ淬滅基因相連接；標簽序列A與FAM熒光基因相連接，標簽序列B與HEX熒光基因相連接。

7.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求5-6所述的試劑盒在鑒定番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1中的應用。

8.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求5-6所述的試劑盒在鑒定番茄中是否含有番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-1中的應用。

9.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求5-6所述的試劑盒鑒定或區分含有Ty-1的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄和不含有Ty-1的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄中的應用。

10.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求5-6所述的試劑盒在區分純合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄(Ty-1/Ty-1)、純合的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄(ty-1/ty-1)和雜合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄(Ty-1/ty-1)中的應用。

11.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求5-6所述的試劑盒在Ty-1基因在番茄抗TYLCV育種中的應用。

12.根據權利要求8或9中任一項所述的應用，其特征在于是利用試劑盒擴增待檢測的番茄樣品，檢測和分析擴增產物。