[發明專利]一種用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑及其應用

在審

• 申請號: 202010962199.1
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN111996270A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 魏宏泉;肖宏;孫相鑫;藍麗;姜駿飛
• 申請（專利權）人: 壹宏（深圳）基因有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;郭燕

本申請公開了一種用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑及其應用。本申請用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑包括Seq ID No.1所示序列的上游引物和Seq ID No.2所示序列的下游引物。本申請用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑，能夠準確有效的從提取自糞便樣品的核酸中檢測糞便雙歧桿菌屬，能更好的避免糞便雙歧桿菌屬的漏檢，對臨床檢驗指導和用藥具有重要意義。

技術領域

本申請涉及糞便微生物檢測領域，特別是涉及一種用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑及其應用。

背景技術

人類的腸道中生存著數量龐大的不同種類的微生物，這些微生物形成的微生態菌膜屏障，對維持人體正常免疫防御功能具有重要作用。腸道微生物是人體內最龐大、最復雜的微生態系統。腸道微生物及其代謝產物能夠調節人體健康，是人體健康或疾病的重要參考指標。

腸道微生物中，雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)約占正常成人腸道菌群的3％，嬰兒腸道菌群75％-91％，是一種重要的維持腸道微生態平衡的生理菌，具有預防腹瀉、預防腸道感染、緩解便秘和免疫調節的作用。因此，如何快速有效的檢測人體腸道內的雙歧桿菌屬，對分析腸道菌群結構、臨床檢驗指導和用藥、保持腸道菌群動態平衡、維持健康、預防疾病等都具有重要意義。

目前比較常規的檢測人體腸道內的雙歧桿菌屬的方法是，對糞便中的雙歧桿菌屬進行檢測，傳統的作法是，對糞便樣品進行稀釋滴種法分離計數，這種方式不僅費時費力，而且對操作人員的技術依賴性較大，需要經驗豐富的試驗人員才能更好的進行檢測。另外，也有研究報道采用常規PCR等方法，對提取自糞便樣品的核酸進行常規PCR擴增檢測；但是，由于常規PCR檢測體系本身存在的缺陷，容易產生漏檢或假陰性。

發明內容

本申請的目的是提供一種新的用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑及其應用。

本申請采用了以下技術方案：

本申請的第一方面公開了一種用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑，包括Seq IDNo.1所示序列的上游引物和Seq ID No.2所示序列的下游引物，

Seq ID No.1：5’-ATACCCTGGTAGTCCACGC-3’

Seq ID No.2：5’-ACATCCAGCATCCACCGT-3’。

需要說明的是，本申請的試劑能夠特異性的針對糞便樣品中的糞便雙歧桿菌屬進行檢測。本申請的檢測對象是提取自糞便樣品的核酸；原則上，這些核酸中包含來自于人的基因組信息，以及來自于糞便中的各種微生物的基因組信息。但是，具體的糞便核酸樣本中含有哪些微生物的基因組信息，是不確定的；本申請的試劑能夠用于確定或排除糞便核酸樣本中是否含有糞便雙歧桿菌屬。從檢測原理上來說，本申請是采用糞便雙歧桿菌屬的屬特異性檢測引物通過PCR擴增進行檢測，現有技術中也有關于雙歧桿菌PCR檢測的相關研究，但是，現有的雙歧桿菌PCR檢測方案不能有效的對糞便核酸樣本中的糞便雙歧桿菌屬進行檢測。因此，本申請研發了一種新的能夠特異性的針對糞便微生物中的糞便雙歧桿菌屬進行檢測的試劑。

本申請的一種實現方式中，本申請的試劑還包括用于染料法實時熒光定量PCR擴增的試劑。

本申請的一種實現方式中，用于染料法實時熒光定量PCR擴增的試劑包括TBGreen Premix Ex Taq反應液和ROX參比染料。

需要說明的是，本申請將用于染料法實時熒光定量PCR擴增的試劑組合在一起可以方便使用，從而便于糞便雙歧桿菌屬的檢測；可以理解，用于染料法實時熒光定量PCR擴增的試劑也可以通過市售購買獲得。

本申請的第二方面公開了本申請用于糞便中雙歧桿菌屬檢測的試劑在非診斷治療目的的糞便微生物檢測中的應用。