[發明專利]突變基因及構建短肢性侏儒癥小型豬模型的方法和用途

有效

• 申請號: 202010959862.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN114181944B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 趙建國;孫澤文;張穎;王霄;秦國嵩;姚婧
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N5/10;C12N15/01;C12N15/85;A01K67/027;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

本發明提供一種小型豬的SLC13A1突變基因，所述突變基因與野生型豬SLC13A1基因相比，具有p.W47R的突變。本發明提供了一種構建體，所述構建體包含所述SLC13A1突變基因。本發明還提供了一種重組細胞，所述重組細胞由所述構建體轉化受體細胞獲得。本發明提供了一種制備骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥的小型豬模型的方法。利用本發明提供的SLC13A1突變基因制備骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥的豬模型，研究人類或動物的骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥的發病機理，對于臨床預防、診斷和治療人類或動物的骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥具有重大的指導意義。

技術領域

本發明屬于基因工程領域。具體地，本發明涉及一種SLC13A1突變基因。本發明還涉及該突變基因用于構建骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥小型豬模型的用途以及一種骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥小型豬模型的構建方法。

背景技術

小型豬是一種非常好的可用于研究人類疾病的致病病因、分子機制以及治療方法的動物模型。巴馬豬為我國特有的地方豬種，主要產自中國廣西省，在外觀上巴馬豬表現為典型的“兩頭烏”特征，即頭部和臀尾部毛發為黑色，而其他部分為白色。近年來，巴馬豬因其具有體型較小以及解剖學結構與人類相近的優勢，逐漸被廣大科學工作者認定為是構建人類疾病醫學研究的大動物模型的良好材料，故此具有極高的培育價值。

骨骼發育不良、短肢性侏儒癥大多是由于硫酸鹽代謝異常或硫酸酯酶表達失調所引起的。骨骼發育不良會導致個體產生各種疾病如骨質疏松、關節炎等。在畜牧業生產中，動物出現骨骼發育疾病會導致生產量下降，直接造成經濟損失。骨骼發育對于畜牧業生產具有重要意義。

硫酸鹽的吸收過程首先通過SLC13A1硫酸鹽轉運蛋白轉運進小腸或腎上皮細胞內，然后經過SLC26A1轉運進血液中運送至身體各處，滿足機體需求。因此，SLC13A1作為轉運硫酸鹽過程中的第一步，其作用至關重要。

現有的硫酸鹽轉運異常導致的骨骼發育不良模型為小鼠模型。這些小鼠模型能模擬一部分疾病表型和幫助研究病理機制，但是還存在一些不足。小鼠的骨骼發育與人類不盡相同，因此，在研究疾病病理上存在一些局限。所以，亟需在與人類生理結構相近的大型動物中構建該疾病的模型。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種小型豬的SLC13A1突變基因。具有本發明所述突變基因的轉基因家系小型豬的表型和遺傳模式與骨骼發育不良、軟骨發育不全或短肢性侏儒癥相符合，可以作為該人類遺傳疾病的大動物模型，從而為針對該疾病的病理研究、藥物篩選、藥效評價等研究提供支持。

一方面，本發明提供了一種小型豬的SLC13A1突變基因，所述突變基因與野生型豬SLC13A1基因相比，具有p.W47R的突變。

優選地，所述SLC13A1突變基因的1-50位氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；

SEQ ID NO:27

MKVSYVLVYRRLLLVVFTLLFLLPLPIILGTKEAECAYTLFVVAMFRLTE

優選地，所述小型豬為巴馬小型豬。

根據本發明所述的SLC13A1突變基因，其中所述突變基因與野生型豬SLC13A1基因相比，具有c.139TA的突變；

優選地，所述SLC13A1突變基因的第2號外顯子的序列如SEQ ID NO:28所示:

SEQ ID NO:28

ATGAAAGTCTCTTATGTTTTAGTTTACCGCCGGCTTCTCTTAGTAGTTTTCACACTGTTGTTTTTATTGCCATTGCCAATCATCCTCGGCACCAAGGAAGCAGAATGTGCCTACACCCTCTTCGTTGTTGCCATGTTTAGGCTGACAGAA