[發(fā)明專利]突變基因及構(gòu)建短肢性侏儒癥小型豬模型的方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010959862.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN114181944B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙建國;孫澤文;張穎;王霄;秦國嵩;姚婧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N5/10;C12N15/01;C12N15/85;A01K67/027;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.一種小型豬的SLC13A1突變基因，所述突變基因與野生型豬SLC13A1基因相比，具有p.W47R的突變；

優(yōu)選地，所述SLC13A1突變基因的1-50位氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；

優(yōu)選地，所述小型豬為巴馬小型豬。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SLC13A1突變基因，其中所述突變基因與野生型豬SLC13A1基因相比，具有c.139TA的突變；

優(yōu)選地，所述SLC13A1突變基因的第2號外顯子的序列如SEQ ID NO:28所示。

3.一種構(gòu)建體，所述構(gòu)建體包含如權(quán)利要求1或2所述的SLC13A1突變基因。

4.一種重組細胞，所述重組細胞由如權(quán)利要求3所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞獲得；

優(yōu)選地，所述重組細胞為豬細胞，更優(yōu)選地為巴馬小型豬細胞。

5.一種制備骨骼發(fā)育不良、軟骨發(fā)育不全或短肢性侏儒癥小型豬模型的方法，所述方法包括：

改變小型豬的SLC13A1基因，使SLC13A1基因編碼蛋白的第47位色酰胺(Trp)突變?yōu)榫彼?Arg)；

優(yōu)選地，所述方法包括：

改變小型豬的SLC13A1基因，使SLC13A1基因的第139位堿基由T變?yōu)锳。

6.一種篩選SLC13A1基因突變的骨骼發(fā)育不良、軟骨發(fā)育不全或短肢性侏儒癥小型豬模型的方法，所述方法包括以下步驟：

1)提取待測生物樣品的核酸DNA；

2)確定所述核酸DNA的序列；

3)所述核酸的序列或其互補序列，與野生型SLC13A1基因相比具有p.W47R突變，更優(yōu)選地，具有c.139TA突變，所述突變是骨骼發(fā)育不良、軟骨發(fā)育不全或短肢性侏儒癥的指示；

所述生物樣品選自血液、皮膚、毛發(fā)和肌肉中的至少一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，確定所述核酸的序列包括如下步驟：

以DNA為模板，采用豬SLC13A1基因的特異性引物，進行PCR，得到擴增產(chǎn)物并對擴增產(chǎn)物進行測序；

優(yōu)選地，所述正向引物序列如SEQ ID NO:3所示，反向引物序列如SEQ ID NO:4所示。

8.一種篩選SLC13A1基因突變的骨骼發(fā)育不良、軟骨發(fā)育不全或短肢性侏儒癥小型豬模型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括SLC13A1基因的特異性引物。

9.如權(quán)利要求1或2所述的突變基因、如權(quán)利要求3所述的構(gòu)建體、如權(quán)利要求4所述的重組細胞或如權(quán)利要求8所述的試劑盒在制備用于篩選治療和/預(yù)防骨骼發(fā)育不良、軟骨發(fā)育不全或短肢性侏儒癥的動物模型中的用途；優(yōu)選地，所述動物模型為哺乳動物模型；更優(yōu)選地，所述哺乳動物為小鼠、猴或小型豬。