[發明專利]一種豬致病性大腸桿菌雙價LTB毒素及制備工藝和應用

有效

• 申請號: 202010957914.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN111825774B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 張淵魁;唐青海
• 申請（專利權）人: 兆豐華生物科技（南京）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K16/02;C07K16/12;A61K39/295;A61K39/187;A61K39/108;A61P31/04;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 李嘉寧

本發明涉及生物疫苗技術領域，尤其是一種豬致病性大腸桿菌雙價LTB毒素及制備工藝和應用，所述豬致病性大腸桿菌雙價LTB毒素基因核酸序列如SEQ ID No：1所示。本發明還制備了其特異性的抗體，并與豬瘟脾淋苗聯合制備成二聯疫苗，能夠顯著增強豬瘟特異性抗體水平，而且能夠同時減少哺乳仔豬的腹瀉率；做到“一針兩防”，更高效、更經濟，安全，有效降低了抗生素在治療方面的應用，減少了抗生素過量使用所帶來的一系列問題。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體領域為一種豬致病性大腸桿菌雙價LTB毒素及應用。

背景技術

大腸桿菌為兩端鈍圓的小桿菌，具有周身鞭毛，能運動，屬革蘭氏陰性菌。其抗原成分較為復雜，包括：O 抗原（菌體抗原）、H 抗原（鞭毛抗原）及 K 抗原（莢膜抗原）。目前為止已確定的大腸桿菌 K 抗原 103 種、O 抗原 171 種和 H 抗原 56 種。腸毒性大腸桿菌的纖毛抗原，各血清型之間沒有交叉反應纖毛血清型種類越多，每種纖毛生長的絕對數量就應該越少，其所表現出來的抗原性也越弱。

致瀉性大腸桿菌是引起人畜腹瀉的致病性大腸桿菌的通稱，主要包括腸致病性大腸桿菌 (EPEC)、腸出血性大腸桿菌 ( EHEC) 、腸侵襲性大腸桿菌(EIEG) 和產腸毒性大腸桿菌 (ETEC )。而產腸毒素性大腸桿菌 (ETEC) 是引起小兒腹瀉的主要病原菌之一，也是旅游者腹瀉的病原菌。它的特征在于能夠產生兩種類型的毒力因子：促進腸上皮細胞結合和定植的粘附素和負責液體分泌的腸毒素，其中ETEC分泌的毒性蛋白有2種：高分子量熱不穩定毒素（heat-labile enterotoxin，LT）和低分子量熱穩定毒素（heat-stableenterotoxin，ST）。

高分子量熱不穩定毒素(LT)是由1個A亞基（A subunit of Escherichia coliheat-labile enterotoxin，LTA）和5個B亞基單體（B subunit of Escherichia coliheat-labile enterotoxin，LTB）組成的。A亞基與細胞膜上的 GM1神經節苷脂和糖蛋白受體結合。B亞基是LT的免疫原性及受體結合部位，主要與哺乳動物細胞膜上GM1神經節苷脂特異性結合，形成通道，導致 A亞基進入靶細胞，具有黏膜佐劑活性，是已知的有效地黏膜免疫佐劑。因為LTB去掉了 LT的毒性 A 亞單位——主要識別腸黏膜上皮細胞膜的受體神經節苷脂GM1，并與之結合形成復合物，本身不具有毒性，可以作為佐劑輔佐外來抗原對機體產生高效的黏膜免疫，是疫苗研究中的重點內容。LTB 作為皮下免疫佐劑免疫機體后，刺激產生的特異性 Ig G 和sIg A的含量均較高，能誘導黏膜免疫應答，不會引起過敏，因為其激活的是 Th1 途徑。而大腸桿菌的腸毒素質粒和耐藥性質粒能經結合配對傳遞給其他腸道細菌，甚至傳遞給其他非大腸桿菌腸道細菌使之成為能產腸毒素并具有耐藥性的致病菌。此外，抗原與其聯合進行黏膜免疫顯示更高的免疫原性，可有效誘導和增強對腸道有關病毒的黏膜免疫應答。目前國內外有關豬LTB不同基因型融合表達的研究案例并不多。

豬瘟（Classical swine fiver）是由豬瘟病毒（Classical swine fiver virus，CSFV）引起的豬的一種高度接觸性、出血性傳染病，其流行范圍廣、致死率高，是養豬業的重大威脅之一，被我國定為一類傳染病，世界動物衛生組織（OIE）將其列為Ａ類烈性傳染病。我國于20世紀50年代研制成功的豬瘟兔化弱毒苗具有良好的免疫原性，幾十年來，我國一直采用以豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種的防控措施，使我國豬瘟疫情得到了有效控制，該疫苗對全世界的豬瘟防控做出了重要的貢獻。

然而，近年來，豬瘟在我國出現了新的流行特點：區域性大流行的情況少見，零散發生的情況多見；典型豬瘟病例少見而非典型豬瘟病例常見，持續感染與隱性感染的問題較嚴重。在臨床觀察中發現，某些病毒的感染能夠干擾豬瘟疫苗的免疫效果，因此提高疫苗質量、做好常規的免疫工作對豬瘟的防控十分重要。