[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010955272.2
• 申請(qǐng)日: 2020-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112114140A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉朝陽(yáng);欒大偉;劉萍;李雅慧;張?zhí)煲?/a>
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 天津企興智財(cái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12226
• 代理人: 馬倩倩

1.一種新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括設(shè)有包被板以及樣品墊的檢測(cè)卡，包被板的金標(biāo)區(qū)包被有膠體金標(biāo)記抗人IgA，檢測(cè)區(qū)包被有新型冠狀病毒重組抗原，質(zhì)控區(qū)包被羊抗鼠IgG。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：新型冠狀病毒重組抗原為S-RBD蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述樣品墊上涂有樣本處理液，所述樣本處理液為含BSA的質(zhì)量濃度為0.5-1.5％、酪蛋白的質(zhì)量濃度為0.5-1％，蔗糖的質(zhì)量濃度為0.3-1.2％、海藻糖的質(zhì)量濃度為0.1-1.2％、Procline的體積濃度為0.05-0.3％、tween-20體積濃度為0.05-0.5％的pH為7.0-7.6的tris緩沖液；且樣品墊的制備方法如下，將樣品墊處理液以45-85微升每平方厘米的量，噴涂或浸泡玻纖膜或聚酯膜，37-45℃條件下，烘干8-16小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：膠體金標(biāo)記抗人IgA的制備包括如下步驟，向均一的膠體金溶液中添加K₂CO₃，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.5，向調(diào)好pH的溶液中添加抗人IgA，使其蛋白含量為15-60μg/mL，偶聯(lián)0.5-4小時(shí)，向其中添加終止液，終止偶聯(lián)反應(yīng)，終止液的終濃度(質(zhì)量體積比)為1-1.5％；終止反應(yīng)后的0.5-2小時(shí)后離心處理，離心參數(shù)為12000-18000RPM，離心處理15-30min，棄上清，沉淀用復(fù)溶液復(fù)溶，2-8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：終止液為牛血清蛋白、脫脂乳粉或甘氨酸中的一種或兩種所配制的水溶液，當(dāng)終止液為其中的一種時(shí)，需配制成為質(zhì)量體積比為5％-10％的溶液，當(dāng)為其中的兩種時(shí)，牛血清蛋白與脫脂乳粉或甘氨酸的質(zhì)量體積比為1：1-4：1，固體質(zhì)量含量和液體體積比為10％；所述復(fù)溶液為0.01-0.05M Tris或PB緩沖液，pH為7.4-8.2，向其中加入NaCl質(zhì)量體積比為0.5-1％,海藻糖質(zhì)量體積比為0.2-1％，PEG20000的質(zhì)量體積比為0.1％-3％；牛血清蛋白質(zhì)量體積比為0.5-3％，Triton X-405體積濃度0.5-1％。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述膠體金溶液通過(guò)如下方法制備，將氯金酸配制成質(zhì)量體積比為1％-10％的溶液，再向煮沸的純化水中添加上述溶液至含氯金酸質(zhì)量體積比為萬(wàn)分之一到萬(wàn)分之四，繼續(xù)煮沸2-5分鐘，將0.1-0.2M的檸檬酸鈉，按每100mL氯金酸溶液中添加500-800微升的量，繼續(xù)攪拌加熱10-20分鐘，制備出粒徑均一的膠體金溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：將膠體金標(biāo)記抗人IgA鋪勻在標(biāo)記墊上，37℃條件下，烘干12小時(shí)，得到標(biāo)記墊；分別將新型冠狀病毒重組抗原以及羊抗鼠IgG配制成蛋白含量0.5-2.0mg/mL的溶液，使用劃膜儀分別包被在T線和C線的位置37℃干燥后得到包被的硝酸纖維素膜，包被參數(shù)為0.5-1.5μL/cm；將吸水紙、硝酸纖維素膜、標(biāo)記墊、濾血膜、樣品墊依次搭接的粘貼在PVC板上。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述濾血膜經(jīng)過(guò)抗RBC抗體處理后使用，處理濃度在0.1mg/mL，處理量為60微升每平方厘米，37℃條件下，烘干12小時(shí)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒IgA抗體膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于：還包括樣本稀釋液，0.05M PB緩沖液，pH為8.0，向其中加入NaCl質(zhì)量體積比為0.9％-2％，tween20體積比為0.05％-0.3％。

10.如權(quán)利要求1-9所述的試劑盒在制備新型冠狀病毒IgA檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。