[發明專利]產氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010953405.2
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN111808202B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 曹文龍;孔迪;滕小锘;張大鶴
• 申請（專利權）人: 蘇州世諾生物技術有限公司;蘇州米迪生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N5/10;A61K39/08;A61P31/04;G01N33/569
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒

本發明公開了一種產氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗、其制備方法及應用。所述疫苗包蛋白組合物以及醫藥學上可接受的載劑，所述蛋白組合物包含分別具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10所示序列的三種融合蛋白。本發明提供的所述疫苗無任何毒性，安全性高，免疫原性好，能夠在動物體內產生較強的體液免疫，免疫后的動物能夠抵御強毒攻毒，并且還可以使用生物反應器大規模無血清懸浮培養制備，具有質控容易、批次間穩定、生產成本低等優點。

技術領域

本發明涉及一種基因工程疫苗，具體涉及一種產氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗、其制備方法及應用，屬于動物免疫藥物技術領域。

背景技術

產氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens，CP）是一種重要的人畜共患病的病原，可以引起人和家畜的多種疾病，如牛羊猝狙、羔羊痢疾和羊腸毒血癥；豬脹氣及猝死、仔豬壞死性腸炎；馬、鹿、兔的梭菌性腸炎等。不僅威脅著人類的健康，而且對畜牧業造成了巨大的經濟損失。由于產氣莢膜梭菌病具有發病急、病程短且死亡率極高的特點，因此免疫接種是防控該病的有效方法。目前已證實產氣莢膜梭菌至少存在15種以上外毒素，其中α、β、ε、ι毒素是四種主要致病性毒素，根據分泌毒素的類型可將產氣莢膜梭菌分為A、B、C、D和E五個型。很多菌株還產生腸毒素（Clostridium Perfringens，CPE）、β2毒素以及壞死性腸炎B樣毒素（Necrotic nteritis B-like toxin，NetB）等。產氣莢膜梭菌α毒素（clostridiumperfringens α toxin）是產氣莢膜梭菌最重要的毒素之一，它具有細胞毒性、溶血活性、致死性、皮膚壞死性、血小板凝集和增加血管滲透性等特性。α毒素對A型產氣莢膜梭菌感染的免疫預防有著極為重要的意義。產氣莢膜梭菌β1毒素（clostridium perfringens β1toxin）只能從B型和C型產氣莢膜梭菌中分離得到，具有致死性，形成組織壞死并且對胰蛋白酶穩定，是一種神經毒素。產氣莢膜梭菌β2毒素（clostridium perfringens β2 toxin）存在于C型產氣莢膜梭菌培養物中，與β1毒素具有相似的生物學活性，抗β2毒素的抗體能識別純化的β2毒素，并能與β1毒素發生弱反應，然而，抗β1毒素的抗體只能與β1毒素反應，卻不能與β2毒素發生反應。β1毒素和β2毒素均具有細胞毒性，能夠引發腸粘膜的出血性壞死。產氣莢膜梭菌ε毒素（clostridium perfringens epsilon toxin）是由B型和D型氣莢膜梭菌產生的一種壞死性和致死性毒素，它可促使動物的主動脈和其它動脈收縮而導致血壓升高，還具有與血管上皮受體結合的能力，使血管通透性增高，最終引起致死性水腫。ι毒素（iota-toxin）僅由E型氣莢膜梭菌分泌，由Ia和Ib兩個部分構成。Ia和Ib單獨存在時均無毒性，同時存在時具有細胞毒性、致死性。NetB毒素可以從A型和C型氣莢膜梭菌中分離出來，NetB毒素作為一種分泌毒素極易作用于宿主免疫系統。

當前產氣莢膜梭菌病免疫所用疫苗主要是類毒素滅活疫苗，此種類毒素疫苗的生產由于需要產氣莢膜梭菌的培養、毒素的滅活及濃縮，因而存在成本高、耗時長、病原菌擴散等缺點。而如CN110051834A、CN107308445A等提供的基因工程疫苗都只能保護某一個或者某幾個梭菌引起的感染，不能提供全面的保護，且重組蛋白是在包涵體中獲得表達，免疫原性較差。此外，培養上清中的各種微小毒素以及細菌的代謝產物往往成為免疫動物的致敏原，容易產生不良反應甚至導致免疫失效。

有鑒于此，業界亟待發展出一種能夠同時表達多種毒素蛋白的、安全性高、免疫原性強的基因工程亞單位疫苗。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種產氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗、其制備方法及應用，以克服現有技術中的不足。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：