[發(fā)明專利]產(chǎn)氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010953405.2
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN111808202B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹文龍;孔迪;滕小锘;張大鶴
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州世諾生物技術(shù)有限公司;蘇州米迪生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N5/10;A61K39/08;A61P31/04;G01N33/569
• 代理公司: 南京利豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒

1.蛋白組合物，包含：序列如SEQ ID NO:2所示的第一融合蛋白，序列如SEQ ID NO:6所示的第二融合蛋白和序列如SEQ ID NO:10所示的第三融合蛋白。

2.基因組合物，包含分別用于編碼權(quán)利要求1所述蛋白組合物中第一融合蛋白、第二融合蛋白、第三融合蛋白的編碼基因。

3.如權(quán)利要求2所述的基因組合物，其特征在于包含：序列如SEQ ID NO:1所示的第一核酸分子，序列如SEQ ID NO:5所示的第二核酸分子和序列如SEQ ID NO:9所示的第三核酸分子。

4.重組載體組合物，包括：

包含權(quán)利要求1所述蛋白組合物中第一融合蛋白的編碼基因的第一重組載體；

包含所述蛋白組合物中第二融合蛋白的編碼基因的第二重組載體；以及

包含所述蛋白組合物中第三融合蛋白的編碼基因的第三重組載體。

5.如權(quán)利要求4所述的重組載體組合物，其特征在于：所述第一重組載體、第二重組載體、第三重組載體包括pFastBac1或pVL1393。

6.宿主細胞組合物，包括：

包含權(quán)利要求1所述蛋白組合物中第一融合蛋白的編碼基因的第一宿主細胞；

包含所述蛋白組合物中第二融合蛋白的編碼基因的第二宿主細胞；以及

包含所述蛋白組合物中第三融合蛋白的編碼基因的第三宿主細胞。

7.如權(quán)利要求6所述的宿主細胞組合物，其特征在于：所述第一宿主細胞、第二宿主細胞、第三宿主細胞選自Sf9細胞系，所述Sf9細胞系包括Sf9、High Five或 Sf21細胞。

8.一種免疫組合物，其特征在于包括：權(quán)利要求1所述的蛋白組合物；以及，醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。

9.如權(quán)利要求8所述的免疫組合物，其特征在于：所述醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑包括MONTANIDE ISA 206 VG、MONTANIDE ISA 201 VG、MONTANIDE ISA 15 VG、液體石蠟、樟腦油、植物細胞凝集素之中的任意一種或者兩種以上的組合。

10.一種蛋白組合物的制備方法，其特征在于包括：

提供權(quán)利要求1所述蛋白組合物中第一融合蛋白、第二融合蛋白、第三融合蛋白的編碼基因；

分別將所述第一融合蛋白的編碼基因、第二融合蛋白的編碼基因、第三融合蛋白的編碼基因克隆到穿梭載體中，分別獲得含有相應(yīng)目的基因的第一重組穿梭載體、第二重組穿梭載體、第三重組穿梭載體；

分別將所述第一重組穿梭載體、第二重組穿梭載體、第三重組穿梭載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，并分離獲得分別含有相應(yīng)目的基因表達框的第一重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒、第二重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒、第三重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒；

分別以所述第一重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒、第二重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒、第三重組桿狀病毒基因組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染昆蟲細胞，并分別獲得相應(yīng)的第一重組桿狀病毒、第二重組桿狀病毒、第三重組桿狀病毒；

分別將所述第一重組桿狀病毒、第二重組桿狀病毒、第三重組桿狀病毒接種昆蟲細胞并進行培養(yǎng)，之后分離獲得所述第一融合蛋白、第二融合蛋白、第三融合蛋白。

11.如權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于：所述穿梭載體包括pFastBac1或pVL1393；和/或，所述昆蟲細胞選自Sf9細胞系，所述Sf9細胞系包括Sf9、High Five或 Sf21細胞。

12.一種產(chǎn)氣莢膜梭菌基因工程亞單位疫苗的制備方法，其特征在于包括：采用權(quán)利要求10-11中任一項所述的方法制備第一融合蛋白、第二融合蛋白、第三融合蛋白，并將所述第一融合蛋白、第二融合蛋白、第三融合蛋白與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑混合。