[發(fā)明專利]一種抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體、應(yīng)用及檢測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010951208.7
• 申請(qǐng)日: 2020-09-11
• 公開（公告）號(hào): CN112094351B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白義;吳桐;李曉敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京東方百泰生物科技股份有限公司;北京精益泰翔技術(shù)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/42
• 分類號(hào): C07K16/42;C12N15/13;G01N33/577;C12N15/85;C12N5/10
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1.一種抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體，其特征在于，所述檢測性抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述檢測性抗體選自以下任意一種：

(A-1)所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:5，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:9；

(A-2)所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:6，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:10；

(A-3)所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:7，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID NO:11。

2.如權(quán)利要求1所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體，其特征在于，所述檢測性抗體還包括重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)，所述重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列選自人的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或鼠的IgG1、IgG2a、IgG2b；所述輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列為人或鼠的Cκ。

3.如權(quán)利要求2所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體，其特征在于，所述重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列為人的IgG4，所述輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列為人的Cκ。

4.一種多肽或蛋白，其特征在于，所述多肽或所述蛋白包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體。

5.一種多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體的氨基酸序列。

6.一種重組DNA表達(dá)載體，其特征在于，所述重組DNA表達(dá)載體包含權(quán)利要求5所述的多核苷酸分子。

7.一種轉(zhuǎn)染如權(quán)利要求6所述的重組DNA表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母細(xì)胞或原核細(xì)胞。

8.一種轉(zhuǎn)染如權(quán)利要求7所述的重組DNA表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞，所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為HEK293E細(xì)胞、CHO細(xì)胞或NS0細(xì)胞。

9.一種檢測試劑或試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑或所述試劑盒均包括權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體。

10.一種如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體用于檢測體液中抗VEGFR-2單克隆抗體藥物濃度的應(yīng)用。

11.一種抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

S1、用pH 9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗VEGFR-2單克隆抗體的檢測性抗體的全抗體至2μg/ml，以100μl/孔加到96孔酶標(biāo)板中；4℃過夜包被，用300μl/孔PBST洗滌三次，再加入4％milk-PBST，在37℃封閉1h；

S2、加入含抗VEGFR-2單克隆抗體的血清樣品和對(duì)應(yīng)梯度稀釋的不同濃度的抗VEGFR-2單克隆抗體的標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品中的抗體濃度分別為240ng/ml、120ng/ml、60ng/ml、30ng/ml、15ng/ml、7.5ng/ml、3.75ng/ml、1.875ng/ml、0ng/ml，37℃孵育1-2h；用300μl/孔PBST洗滌五次，再加入用1:5000稀釋的HRP標(biāo)記的小鼠抗人的IgG1，37℃孵育1h；

S3、用300μl/孔PBST洗滌八次，TMB顯色試劑盒室溫顯色10min，用2M H₂SO₄終止顯色，50μl/孔；450nm/630nm讀數(shù)；

S4、根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和讀數(shù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將所述血清樣品的讀數(shù)代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算抗VEGFR-2單克隆抗體的濃度。