[發(fā)明專利]一種預(yù)防非洲豬瘟重組偽狂犬病病毒活疫苗及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010951150.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112029736B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳晴;周遠(yuǎn)成;王彬;高潔;伏顯華;馮倩倩;杜繼文;李淑萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中海生物科技有限公司;畜科生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/85;C12N15/34;C12N15/38;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發(fā)明涉及一種預(yù)防非洲豬瘟重組偽狂犬病活疫苗及其制備，本發(fā)明構(gòu)建的非洲豬瘟病毒CD2V/P72/B602L基因和能敲除野生型P72基因的sacas9SgRNA序列重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株在BHK細(xì)胞株獲得可以表達(dá)重組CD2V/P72/B602L蛋白抗原，其表達(dá)量穩(wěn)定，同時(shí)經(jīng)過(guò)體外細(xì)胞模擬實(shí)驗(yàn)表明該方法可以干擾病毒復(fù)制。以該重組株偽狂病病毒株作為生產(chǎn)毒株，經(jīng)過(guò)懸浮微載體培養(yǎng)獲得的表達(dá)表達(dá)重組CD2V/P72/B602L蛋白抗原制備成活疫苗，可以預(yù)防最近流行的非洲豬瘟病毒，還可以做成噴霧飲水形式疫苗減少注射應(yīng)激反應(yīng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種預(yù)防非洲豬瘟重組偽狂犬病病毒活疫苗及其制備方法，屬于獸用生物制品領(lǐng)域。

技術(shù)背景

非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起豬的一種急性、烈性傳染病。ASFV可感染家豬、野豬和蜱類，無(wú)明顯的品種、性別和年齡差異，是唯一一種蟲(chóng)媒傳播的DNA病毒。廣泛分布的蜱類是重要的儲(chǔ)存宿主和傳播媒介。接觸傳播、經(jīng)食物傳播和軟蜱吸血傳播是本病的主要傳播途徑，病毒在野豬之間、野豬與家豬之間以及在家豬之間循環(huán)傳播使得該病難以根除。該病病程短、死亡率高，家豬和歐洲野豬的病死率最高達(dá)100％，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害巨大，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)影響。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為須通報(bào)動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。目前ASF缺乏有效的疫苗，預(yù)防要依靠嚴(yán)格的邊境檢疫、養(yǎng)殖場(chǎng)良好的生物安全措施以及野豬的跨境移動(dòng)，而一旦暴發(fā)則需要采取緊急根除和凈化以及區(qū)域化管理等措施以控制疫情恢復(fù)生產(chǎn)。非洲豬瘟原發(fā)于非洲，1957年蔓延至歐洲，隨后又傳到了加勒比和巴西^[3-5]。進(jìn)入21世紀(jì)后，該病傳播范圍再次擴(kuò)大，2007年傳入東歐的格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯地區(qū)。在過(guò)去幾年里該病又向西蔓延，進(jìn)入烏克蘭(2012)、白俄羅斯2013)、歐盟(立陶宛、波蘭、拉脫維亞、愛(ài)沙尼亞，2014；希臘2020)以及摩爾多瓦(2016)。2018年8月我國(guó)沈陽(yáng)發(fā)生了第一例ASF，此后全國(guó)蔓延(包括香港、臺(tái)灣)。目前亞洲地區(qū)中韓國(guó)、菲律賓、越南、柬埔寨、印度尼西亞等國(guó)家均有疫情發(fā)生^[3-4]，2019年以來(lái)共有29個(gè)國(guó)家/地區(qū)報(bào)告了新的或正在流行的疫情。由于ASFV難以根除、病死率高、危害大、缺乏有效疫苗。

ASFV是雙鏈DNA病毒，屬于非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬，是該科中唯一一種病毒，通常認(rèn)為只有一個(gè)血清型、24個(gè)基因型，對(duì)外界抵抗力較強(qiáng)。ASFV的潛伏期是4-19d，具體時(shí)間取決于病毒、宿主和感染方式。OIE《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》規(guī)定的潛伏期是15d，作為進(jìn)口隔離、疫點(diǎn)疫區(qū)封鎖解禁的時(shí)間參考。感染豬可能在臨床體征出現(xiàn)前2d已開(kāi)始排毒，感染弱毒株的豬可能在感染70d后仍然持續(xù)排毒。ASF流行病學(xué)很復(fù)雜，受所處環(huán)境、豬的生產(chǎn)體系、有無(wú)媒介蜱存在、人類活動(dòng)以及是否存在野豬等因素影響，在非洲、歐洲和亞洲發(fā)生的感染和流行模式也不同。ASFV雖然致死率高，但感染性并不像口蹄疫等烈性疫病那么強(qiáng)，可能會(huì)在豬群中緩慢傳播。因此開(kāi)發(fā)一種可以預(yù)防或阻斷在豬群中疫苗或藥物非常重要。