[發明專利]一種預防非洲豬瘟重組偽狂犬病病毒活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 202010951150.6
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112029736B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 陳晴;周遠成;王彬;高潔;伏顯華;馮倩倩;杜繼文;李淑萍
• 申請（專利權）人: 北京中海生物科技有限公司;畜科生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12N15/34;C12N15/38;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

1.一種預防非洲豬瘟的重組偽狂犬病病毒活疫苗，其特征在于該疫苗是用重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株作為生產種毒制備的；

所述重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株含有SEQ ID No .1所示的重組序列；

所述SEQ ID No .1所示的重組序列包括sacas9SgRNA基因序列，和編碼SEQ ID No .2，SEQ ID No .3和SEQ ID No .4所示CD2V/P72/B602L蛋白序列的基因序列。

2.如權利要求1所述的一種預防非洲豬瘟的重組偽狂犬病病毒活疫苗，其特征在于所述的該重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株的構建方法，包括：

（1）將非洲豬瘟病毒的CD2V/P72/B602L和sacas9SgRNA 干擾素區域重組融合連接入真核質粒載體構建重組臂重組質粒；

（2）用脂質體轉染的方法將所述重組臂重組質粒轉染至接種了偽狂犬病病毒的BHK細胞株中；通過熒光顯微鏡觀察得到表達有CD2V/P72/B602L蛋白的重組病毒；

（3）進行重復低密稀釋度鋪板克隆篩后獲得穩定表達CD2V/P72/B602L蛋白的陽性病毒株，能穩定高效表達CD2V/P72/B602L和sacas9SgRNA；

（4）通過對重組PRV進行蛋白免疫印跡法篩選出能夠高效穩定表達CDV2/P72/ BL602蛋白的陽性克隆病毒株，該重組病毒被命名為重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株。

3.如權利要求1-2所述的一種預防非洲豬瘟的重組偽狂犬病病毒活疫苗，其特征在于所述的重組偽狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株，在SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No4所示的序列的氨基末端或羧基末端連接上選自如下組的標簽：Poly-Arg、Poly-His、FLAG、Strep-tag II、c-myc以及各種loxp位點。