[發明專利]一種對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法有效
| 申請號： | 202010951090.8 | 申請日： | 2020-09-11 |
| 公開（公告）號： | CN112080546B | 公開（公告）日： | 2022-04-08 |
| 發明（設計）人： | 季學猛;王碩 | 申請（專利權）人： | 南開大學 |
| 主分類號： | C12Q1/18 | 分類號： | C12Q1/18;C12N15/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津合正知識產權代理有限公司 12229 | 代理人： | 邢月;張艷梅 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 敏感 座子 插入 突變體 反向 篩選 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)轉座子插入突變體庫的構建；
(2)殺菌型抗生素和酸聯合處理；
(3)細菌培養與單克隆挑??；
(4)細菌耐酸表型驗證；
所述的轉座子為質粒pUTminiTn5 Km；
所述的步驟(2)中的殺菌型抗生素和酸聯合處理的方法如下：將細菌在酸性培養基中進行培養，然后向其中添加殺菌型抗生素繼續培養；所述的酸性培養基的pH小于細菌的野生型最適生長pH；所述的酸性培養基的pH值為1.5-3.0；
所述的殺菌型抗生素為慶大霉素；所述的殺菌型抗生素的濃度限定為50mg/L。
2.根據權利要求1所述的對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法，其特征在于：所述的步驟(1)轉座子插入突變體庫的構建的方法如下：將轉座子擴增，然后將擴增后的轉座子轉入細菌中進行復制，通過殺菌性抗生素篩選，得到轉座突變子。
3.權利要求1或2所述的對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法的用途，其特征在于：所述的方法在反向篩選重組菌中的應用。
4.權利要求1或2所述的對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法的用途，其特征在于：所述的方法在篩選轉化子中的應用。
5.權利要求1或2所述的對酸敏感轉座子插入突變體的反向篩選方法的用途，其特征在于：所述的方法在篩選自發突變或誘變劑誘變的菌種中的應用。
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