[發明專利]一種小麥全蝕病菌特異性分子檢測引物及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202010950711.0
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112501332B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 趙偉;戚仁德;遲元凱;徐阿妹;汪濤;曹舜;姜戚
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院植物保護與農產品質量安全研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/686;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 高寧馨

1.一種小麥全蝕病菌特異性分子檢測引物，其特征在于，是以R-SNARE蛋白編碼基因GgYkt6為靶標，通過基因序列比對設計引物，實驗驗證其擴增效率及特異性，所述引物的序列為：

GgF1: 5’-CGATTCCAGGGGACTCTGA-3’

GgR1: 5’-TCGGGACGAGCGACAGATA-3’ 。

2.根據權利要求1所述的小麥全蝕病菌特異性分子檢測引物在小麥全蝕病菌中的檢測方法，其特征在于，提取待檢菌株、發病植株或土壤中微生物的DNA，以其為模板，進行PCR擴增，擴增產物進行染色及瓊脂糖凝膠電泳，在紫外光下檢測結果，如果存在一條90bp的特異性條帶，則證明檢測物品中含有小麥全蝕病菌。

3.根據權利要求1所述的小麥全蝕病菌特異性分子檢測引物在PCR檢測中的應用，其特征在于，進行PCR擴增，引物只能在含有小麥全蝕病菌的DNA模版下，特異性的擴增出90bp的條帶，對健康小麥植株、土壤中其它微生物、小麥其它病害擴增不出條帶，可用于定性檢測分離的病原物、發病小麥植株或土壤中是否含有小麥全蝕病菌。

4.根據權利要求1所述的小麥全蝕病菌特異性分子檢測引物在實時定量熒光PCR分子檢測中的應用，其特征在于，基于已定量的標準DNA樣品做出的標準曲線方程，其檢測效率為95.5%，標準品DNA濃度的對數值與Ct值之間的相關系數R²＞0.99，定量線性回歸方程為y= -3.553x + 30.93，其中y為Ct值，x=lg[DNA濃度]。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，可以對小麥全蝕病發病情況作出預報預測，實時定量PCR檢測的最低濃度為10fg/μL，靈敏度高于普通PCR1000倍，通過室內致病力測定，能引起小麥發生全蝕病發生的最低量為每克土壤中含有10pg基因組量。