[發(fā)明專利]食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010948663.1
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112255415A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余丙潔;惠琦;楊選鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 溫州醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 張勛斌

本發(fā)明公開了一種食蟹猴血清中FGF?21濃度的檢測方法，包括以下步驟：(1)在預(yù)包被兔抗人FGF?21多抗的96微孔板上加入待測血清樣品進行孵育；(2)洗板再加入檢測抗體進行孵育；(3)洗板后加入酶標抗體進行孵育；(4)洗板后加入HRP底物四甲基聯(lián)苯胺進行避光孵育，然后加入終止液終止酶反應(yīng)，測定450nm處的吸光度；(5)根據(jù)吸光度的值計算得到血清中的FGF?21濃度。該檢測方法具有較高的準確度和精確度，并且受到干擾小，可以對成纖維細胞生長因子21的作用機制進行更好地研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生化檢測領(lǐng)域，具體涉及一種血清中FGF-21濃度的檢測方法。

背景技術(shù)

成纖維細胞生長因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新的調(diào)節(jié)血糖的因子，由于沒有特異性的葡萄糖吸收細胞，故其生物學(xué)活性方法的開發(fā)一直是難點。

在對成纖維細胞生長因子21進行研究的過程中，我們經(jīng)常需要知道血清中FGF21的準確含量，以便進行進一步的研究其代謝過程和對相關(guān)病癥的影響。目前，研究人員經(jīng)常選用食蟹猴來FGF21藥代動力學(xué)，不過針對食蟹猴血清中FGF21的含量的快速測定方法，還未見專利報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，該檢測方法檢測具有較高的準確度和靈敏度，受到的干擾小。

一種血清中FGF-21濃度的檢測方法，包括以下步驟：

(1)在預(yù)包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上加入待測血清樣品進行孵育；

(2)洗板再加入檢測抗體進行孵育；

(3)洗板后加入酶標抗體進行孵育；

(4)洗板后加入HRP底物四甲基聯(lián)苯胺進行避光孵育，然后加入終止液終止酶反應(yīng)，測定450nm處的吸光度；

(5)根據(jù)吸光度的值計算得到血清中的FGF-21濃度。

該檢測方法的測定原理如下：

該試劑盒基于雙抗體夾心ELISA法定量檢測食蟹猴血清FGF-21的濃度。在預(yù)包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上，加入含有FGF-21的標準溶液或樣品，使其與固相抗體結(jié)合。洗去未結(jié)合物質(zhì)后，加入檢測抗體(生物素化人FGF-21多抗)。洗去未結(jié)合的抗體后，加入辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素(STP-HRP)。洗滌后加入HRP底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色，終止酶反應(yīng)后，測定450nm處的吸光度(OD值)。吸光強度與樣品中所含F(xiàn)GF-21的濃度成正比。

作為優(yōu)選，所述的待測血清為食蟹猴血清。

作為優(yōu)選，步驟(1)中，待測血清樣品的用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為1～1.5h。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，所述的檢測抗體為生物素化人FGF-21多抗，用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為1～1.5h。

作為優(yōu)選，步驟(3)中，所述的酶標為辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為20～30min。

作為優(yōu)選，步驟(4)中，所述的HRP底物四甲基聯(lián)苯胺的用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為15～20min。

作為優(yōu)選，步驟(5)中，將待測樣品的吸光度的值與配制的標準曲線法進行比對，獲得血清中的FGF-21濃度。