[發明專利]食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法

在審

• 申請號: 202010948663.1
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112255415A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 余丙潔;惠琦;楊選鑫
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 張勛斌

1.一種食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在預包被兔抗人FGF-21多抗的96微孔板上加入待測血清樣品進行孵育；

(2)洗板再加入檢測抗體進行孵育；

(3)洗板后加入酶標抗體進行孵育；

(4)洗板后加入HRP底物四甲基聯苯胺進行避光孵育，然后加入終止液終止酶反應，測定450nm處的吸光度；

(5)根據吸光度的值計算得到血清中的FGF-21濃度。

2.根據權利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，所述的待測血清為食蟹猴血清。

3.根據權利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，待測血清樣品的用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為1～1.5h。

4.根據權利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的檢測抗體為生物素化人FGF-21多抗，用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為1～1.5h。

5.根據權利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的酶標為辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為20～30min。

6.根據權利要1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(4)中，所述的HRP底物四甲基聯苯胺的用量為100μL/孔；

孵育的溫度為25～30℃，孵育的時間為15～20min。

7.根據權利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(5)中，將待測樣品的吸光度的值與配制的標準曲線法進行比對，獲得血清中的FGF-21濃度。

8.根據權利要求7所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，標準曲線擬合方法如下：以濃度對數為橫坐標，吸光度(OD值)為縱坐標制備標準曲線，采用Origin7.5數據統計軟件中四參數Log-Logistic(4-PL)模型擬合，其標準曲線成Sigmoidal型曲線。

9.根據權利要求7所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(5)中，配制標準曲線所用的生物基質為10％食蟹猴空白血清；

步驟(1)中，待測血清以空白血清稀釋一定倍數后再以Assay buffer稀釋10倍。

10.根據權利要求1所述的食蟹猴血清中FGF-21濃度的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述待測血清樣品的待測含量在31.25pg/mL～4000pg/mL。