[發明專利]一種檢測果蔬中諾如病毒的方法有效
| 申請號： | 202010947717.2 | 申請日： | 2020-09-10 |
| 公開（公告）號： | CN112080588B | 公開（公告）日： | 2023-10-03 |
| 發明（設計）人： | 白亞龍;周昌艷;張緒富;索玉娟;戴迎春;瞿洋;邵毅 | 申請（專利權）人： | 上海市農業科學院;南方醫科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220 | 代理人： | 鄭立 |
| 地址： | 201106 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 果蔬中諾如 病毒 方法 | ||
1.一種檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟1、將果蔬樣品與洗脫緩沖液混合，收集上清液；
步驟2、在所述上清液中加入磁性探針，捕獲所述上清液中的諾如病毒；
步驟3、將結合諾如病毒的磁性探針加入到溶液中，加熱離心后取上清得到含有諾如病毒RNA的溶液，并進行RT-(q)PCR檢測；
其中，所述磁性探針包括羧基化硅包Fe3O4磁性粒子和豬胃粘膜蛋白，所述羧基化硅包Fe3O4磁性粒子和所述豬胃粘膜蛋白通過偶聯劑共價結合。
2.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟1中，所述洗脫緩沖液為三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液，包括0.01-1％曲拉通、10-50U果膠酶、0.01-0.1mol/L甘氨酸，pH為8-11。
3.如權利要求1或2所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟1中，將所述果蔬樣品和所述洗脫緩沖液混合20-60min。
4.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟2中，所述磁性探針通過包括如下步驟制備得到：
步驟2.1、將FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O溶解于去離子水中，在氮氣保護下加入氨水，制備得到Fe3O4磁性納米粒子；
步驟2.2、將環己烷、正己醇、曲拉通與水混合得到反相微乳液，并加入所述Fe3O4磁性納米粒子，隨后將氨水、TEOS依次加入到所述反相微乳液中，反應得到硅包Fe3O4磁性納米粒子；
步驟2.3、將所述硅包Fe3O4磁性納米粒子分散于甲苯中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，在氮氣保護下反應得到氨基化硅包Fe3O4磁性納米粒子；
步驟2.4、將所述氨基化硅包Fe3O4磁性納米粒子分散于二甲基甲酰胺中，加入丁二酸酐，反應得到羧基化硅包Fe3O4磁性粒子；
步驟2.5、將所述羧基化硅包Fe3O4磁性粒子加入到2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中，加入EDC反應30min后收集沉淀，將沉淀復溶于所述2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中，加入豬胃粘膜蛋白、甘氨酸后得到所述磁性探針。
5.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟2中，調節所述上清液的pH為9.5。
6.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟2中，所述磁性探針的添加量為20-150μg。
7.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟2中，所述磁性探針與所述上清液的混合時間為10-50min。
8.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟3中，所述加熱溫度為80-100℃，加熱時間為5-20min。
9.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟3中，所述離心的轉速為10000rpm-20000rpm，離心時間為5-30min。
10.如權利要求1所述的檢測果蔬中諾如病毒的方法，其特征在于，步驟3中，所述溶液為無RNA酶的水。
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