[發(fā)明專利]一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體微孔板、化學(xué)發(fā)光試劑盒及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010946293.8
• 申請(qǐng)日: 2020-09-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112255413A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 成軍;戴玉柱;陳鴻斌;楊春利;夏挺;閻利;斯友良;陳彧;劉瑋曄;王童;江曉肖;車飛虎;周華君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九0三醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76;C12N15/70;C12N15/66;C12N15/51;C07K14/18;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22
• 代理公司: 浙江杭知橋律師事務(wù)所 33256
• 代理人: 廖靜

1.一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，包括由重組的HCV跨膜蛋白抗原包被得到的微孔板和分別獨(dú)立包裝的樣本稀釋液、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、酶標(biāo)記物工作液、底物液A、底物液B及洗液，底物液A包括魯米諾、鄰苯基苯酚、4-咪唑苯酚及碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括過(guò)氧化脲與磷酸緩沖液(PB)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，底物液A包括質(zhì)量濃度為0.8g/L的魯米諾、質(zhì)量濃度為0.008g/L的鄰苯基苯酚、質(zhì)量濃度為0.025g/L的4-咪唑苯酚、pH9.0且摩爾濃度為0.1mol/L的碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括質(zhì)量濃度為0.3g/L的過(guò)氧化脲、pH7.4且摩爾濃度為0.2mol/L的磷酸緩沖液(PB)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，樣本稀釋液是含有體積濃度為20％的牛血清、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)；洗液是含有體積濃度為0.5％的吐溫-20、體積濃度為0.2％的Proclin 300、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，陰性對(duì)照為熱滅活的非HCV感染者(抗跨膜蛋白抗體陰性)血清或血漿，且人類免疫缺陷病毒抗體、梅毒螺旋體抗體、乙型肝炎病毒表面抗原測(cè)試呈陰性，含體積濃度為0.2％的ProClin 300防腐劑；

陽(yáng)性對(duì)照為熱滅活的HCV感染者(抗跨膜蛋白抗體陽(yáng)性)混合血清或血漿，且人類免疫缺陷病毒抗體、梅毒螺旋體抗體、乙型肝炎病毒表面抗原測(cè)試呈陰性，含體積濃度為0.2％的ProClin 300防腐劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，酶標(biāo)記物工作液是用酶標(biāo)記抗體稀釋液將酶標(biāo)記物原液稀釋至質(zhì)量濃度為0.05μg/ml，酶標(biāo)記物原液是質(zhì)量濃度為1mg/ml的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG標(biāo)記物；

酶標(biāo)記抗體稀釋液是含有質(zhì)量體積濃度為5％的牛血清白蛋白(BSA)、體積濃度為0.5％的酶穩(wěn)定劑、體積濃度為0.1％的吐溫-20、質(zhì)量濃度為5μg/ml的抗鼠抗體阻斷劑、質(zhì)量濃度為1μg/L的紅色色素、體積濃度為0.2％的Proclin 300、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。

6.一種檢測(cè)HCV感染者血清中抗跨膜蛋白抗體的微孔板，其特征在于，包被微孔板的抗原為重組的HCV跨膜蛋白抗原(P7)；

包被微孔板的制備方法包括以下步驟：將重組的HCV跨膜蛋白抗原采用包被液稀釋至0.5μg/ml，將稀釋后HCV跨膜蛋白抗原按照100μl量加入到微孔板中，2-8℃過(guò)夜或37℃2h，洗板洗去沒(méi)有吸附到板上的蛋白，使用時(shí)每孔300μl洗液，反復(fù)洗3遍，拍干；

完成包被的微孔板洗板拍干后，立即封閉；將完成包被的微孔板按200μl每孔的量加入封閉液，2-8℃過(guò)夜或37℃2h封閉，封閉完成后，將封閉液甩掉，利于包被的微孔板密封長(zhǎng)期保存。