[發明專利]一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010946264.1
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112255411A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 成軍;戴玉柱;夏挺;王童;閻利;斯友良;劉瑋曄;陳彧;孫青陽;陳鴻斌;江曉肖;周華君;車飛虎
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍聯勤保障部隊第九0三醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 浙江杭知橋律師事務所 33256
• 代理人: 廖靜

本發明涉及生物技術領域，公開了一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白(抗Core)抗體的化學發光試劑盒，包括由重組的HCV核衣殼蛋白抗原包被得到的微孔板和分別獨立包裝的樣本稀釋液、陰性對照、陽性對照、酶標記物工作液、底物液A、底物液B及洗液，底物液A包括魯米諾、鄰苯基苯酚、4?咪唑苯酚及碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括過氧化脲與磷酸緩沖液(PB)；該試劑盒可以對HCV感染者血清中的抗Core抗體進行體外定性/定量測定，建立HCV感染者血清中抗Core抗體的檢測技術并進行方法學評價，該試劑盒可應用于丙型病毒性肝炎的篩查診斷、病情監測、預后評估、疾病機理和流行病學研究。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及化學發光免疫分析定性/定量試劑盒，具體涉及一種應用重組的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)核衣殼蛋白(Core)抗原包被微孔板，檢測生成的包被抗原-待測抗體-酶標二抗復合物，可以對HCV感染者血清中的抗Core抗體進行體外定性/定量測定，建立HCV感染者血清中抗Core抗體的檢測技術并進行方法學評價，該試劑盒可應用于丙型病毒性肝炎的篩查診斷、病情監測、預后評估、疾病機理和流行病學研究。

背景技術

1974年Golafield M首先報告輸血后非甲非乙型肝炎，1989年Choo QL，Weiner AJ等在Houghton M領導下利用分子生物學技術克隆出了非甲非乙型肝炎的主要病原體隨后被命名為丙型肝炎病毒(HCV)的基因序列，由此引起的疾病稱為丙型肝炎(Hepatitis C)。現已證實丙型肝炎是一種主要經血液傳播的疾病，50-85％感染者成為慢性感染，并可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，10-30％患者可發展為肝硬化，其中肝細胞癌(HCC)年發生率約1-7％，對患者的健康和生命危害極大，已成為嚴重的社會和公共衛生問題。2014年世界衛生組織最新統計表明：全世界大約超過1.85億人感染了HCV，其中感染率以東亞(3.8％)、中亞(3.7％)、北非/中東(3.6％)、南亞(3.4％)及東歐(2.9％)為最高，每年全球約35萬人死于與丙肝有關的疾病。我國丙型肝炎每年發病人數呈逐年上升趨勢，中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會公布的歷年“全國法定傳染病疫情情況”資料顯示：從2007年發病人數不足9.2萬上升到2014年的20.3萬；據此推算國內大約有4000萬HCV感染者，各省市感染率不盡相同，平均感染率約為3.2％，是HCV感染的高流行區。隨著HCV感染治療進入泛基因時代，重組蛋白酶抑制劑的直接使用(Direct Acting Antiviral，DAA)可大大提高患者實現持續病毒學應答的比例(95％)，有望改變HCV感染威脅的嚴峻局面，但目前DAA治療尚面臨著諸多有待解決的問題：(1)“邊緣人群”無法接受有效治療，如注射毒品者、服刑人員以及男同性戀等，加劇了疾病的流行；(2)經規范化DAA治療后，仍有部分患者未出現持續病毒學應答或治療失敗，且DAA治療并不能防止HCV再次感染；(3)醫保支付比例低、治療費用昂貴，患者每療程治療費用在數萬元-數十萬元人民幣。由此可知，慢性HCV感染在未來很長一段時間內依舊是人類健康和全球公共衛生安全的重大威脅。

HCV屬于黃病毒科，病毒體呈球形，基因組為單股正鏈RNA，全長約9.6kb，有7個基因型(1-7)和67個基因亞型，在我國以1b和2a基因型常見，HCV基因組由兩端的5'非編碼區(5'-NCR)、3'非編碼區(3'-NCR)和中間的一個開放讀碼框(ORF)組成，ORF與5'-NCR下游緊鄰，其基因組排列順序為5'-C-E1-E2-NS1-NS2-NS3-NS4-NS5-3'，能編碼一個由3010～3030個氨基酸組成的多聚蛋白前體，如圖1所示，在宿主細胞信號肽酶和病毒自身蛋白酶的作用下，裂解產生10種HCV蛋白，如圖2所示，包括：3種結構蛋白，即核衣殼蛋白(Core)、包膜糖蛋白(E1，E2)、跨膜蛋白(P7)；6種非結構蛋白(NS2，NS3，NS4A，NS4B，NS5A，NS5B)。Core、E1、E2、P7共同組裝成完整的病毒顆粒，非結構蛋白在病毒的生活周期中發揮重要作用。