[發明專利]一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010946264.1
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112255411A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 成軍;戴玉柱;夏挺;王童;閻利;斯友良;劉瑋曄;陳彧;孫青陽;陳鴻斌;江曉肖;周華君;車飛虎
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍聯勤保障部隊第九0三醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/576;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 浙江杭知橋律師事務所 33256
• 代理人: 廖靜

1.一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，包括由重組的HCV核衣殼蛋白抗原包被得到的微孔板和分別獨立包裝的樣本稀釋液、陰性對照、陽性對照、酶標記物工作液、底物液A、底物液B及洗液，底物液A包括魯米諾、鄰苯基苯酚、4-咪唑苯酚及碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括過氧化脲與磷酸緩沖液(PB)。

2.根據權利要求1所述的一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，底物液A包括質量濃度為0.8g/L的魯米諾、質量濃度為0.008g/L的鄰苯基苯酚、質量濃度為0.025g/L的4-咪唑苯酚、pH9.0且摩爾濃度為0.1mol/L的碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括質量濃度為0.3g/L的過氧化脲、pH7.4且摩爾濃度為0.2mol/L的磷酸緩沖液(PB)。

3.根據權利要求1所述的一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，樣本稀釋液是含有體積濃度為20％的牛血清、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。

4.根據權利要求1所述的一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，陰性對照為熱滅活的非HCV感染者(抗核衣殼蛋白抗體陰性)血清或血漿，且人類免疫缺陷病毒抗體、梅毒螺旋體抗體、乙型肝炎病毒表面抗原測試呈陰性，含體積濃度為0.2％的ProClin 300防腐劑；

陽性對照為熱滅活的HCV感染者(抗核衣殼蛋白抗體陽性)混合血清或血漿，且人類免疫缺陷病毒抗體、梅毒螺旋體抗體、乙型肝炎病毒表面抗原測試呈陰性，含體積濃度為0.2％的ProClin 300防腐劑。

5.根據權利要求1所述的一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，酶標記物工作液是用酶標記抗體稀釋液將酶標記物原液稀釋至質量濃度為0.05μg/ml，酶標記物原液是質量濃度為1mg/ml的辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG標記物；酶標記抗體稀釋液是含有質量體積濃度為5％的牛血清白蛋白(BSA)、體積濃度為0.5％的酶穩定劑、體積濃度為0.1％的吐溫-20、質量濃度為5μg/ml的抗鼠抗體阻斷劑、質量濃度為1μg/L的紅色色素、體積濃度為0.2％的Proclin 300、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。

6.根據權利要求1所述的一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光試劑盒，其特征在于，洗液含有體積濃度為0.5％的吐溫-20、體積濃度為0.2％的Proclin300、pH7.4且摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。

7.一種檢測HCV感染者血清中抗核衣殼蛋白抗體的化學發光檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在重組的HCV抗核衣殼蛋白抗原包被微孔板中，先加入樣本稀釋液100μl，再加入10μl待測樣本，蓋上封板膜，振蕩混勻，37℃±1℃溫度下溫育30min，洗滌除去未結合的組分；

(2)設抗體陽性對照1孔，陰性對照2孔，分別加入陰、陽性對照各100μl；設空白對照孔1孔，不加任何樣本；蓋上封板膜，振蕩混勻，37℃±1℃溫度下溫育30min，洗滌除去未結合的組分；

(3)除空白對照孔，其余孔內加入100μl酶標記物工作液，蓋上封板膜，振蕩混勻，37℃±1℃溫度下溫育30min，洗滌除去未結合的酶標記物工作液；

(4)每孔依次加入底物液B、底物液A各50μl，振蕩混勻室溫避光放置15分鐘；其中底物液A包括魯米諾、鄰苯基苯酚、4-咪唑苯酚及碳酸緩沖液(CB)；底物液B包括過氧化脲及磷酸鹽緩沖液(PB；

(5)用化學發光免疫分析儀測量每孔的相對發光強度值RLIV，當樣本RLIV與陰性對照RLIV均值的比值≥2.1時，為陽性；反之，為陰性。