[發明專利]利用微衛星標記鑒定東北黑熊親緣關系的方法

在審

• 申請號: 202010945822.2
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN111926091A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 高建偉
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;G16B20/40;G16B40/00
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 陳新勝

1.一種利用微衛星標記鑒定東北黑熊親緣關系的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：

步驟一、以東北黑熊為研究對象，采用15個微衛星位點對東北黑熊進行多態性分析，其中：15個微衛星位點分別為ABB1、ABB3、ABB4、ABB5、ABB6、ABB7、ABB10、ABB11、ABB12、MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36和UT38；

步驟二、采用QIAamp DNA Investigator試劑盒方法提取黑熊毛發基因組DNA，作為模板待用；PCR產物采用經1％瓊脂糖凝膠電泳檢測依據DL 2000 Marker來判斷是否為目標產物，如果是目標產物，則采用12％的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，20bp Ladder marker用作DNA分子量標記，采用銀染觀察擴增產物的遷徙情況，判斷子代與父本、母本基因型分布；

步驟三、將15個微衛星引物上游5’端進行熒光標記，PCR產物在ABI PRISM 3730基因分析儀上進行分型，采用毛細管電泳方法進行等位基因分析，電泳數據通過GeneScan3.7和GenoTyper3.7轉換成等位基因的片段大小，并自動識別等位基因，使用GeneScan-500[ROX]作為內參，等位基因長度直接從GenoTyper3.7導入Excel表中進行片段大小的分級排序，按照David的方法進行等位基因和基因型的判讀；

步驟四、親權鑒定：

(1)父權排除

父權排除包括雙親鑒定和單親鑒定，其中：單親鑒定即為缺少母本樣品時的親權鑒定；雙親鑒定需要分別比對子代與親代雙親的基因型，并計算非父排除概率；

(2)父權確定

根據個體的等位基因頻率計算親權指數和親權相對機會。

2.根據權利要求1所述的利用微衛星標記鑒定東北黑熊親緣關系的方法，其特征在于所述ABB1、ABB3、ABB4、ABB5、ABB6、ABB7、ABB10、ABB11、ABB12、MSUT2、MSUT4、UT3、UT35、UT36和UT38的PCR擴增引物序列如下：

ABB1：

F:TGAGAAATGGGCTGAAAACC，

R:GGAGACAGGGCTTGTGATGT；

ABB3：

F:TGTGAAAAAGAAAAGGTCGGA，

R:ACAGATACCAACTCATTGAAAGG

ABB4：

F:GATCTGGAGCCAAACACG，

R:CTGCTCCTGAAGCCATAA；

ABB5：

F:CCGGGCTGTTTTCACTAGAA，

R:CCTGGGGTTCTGAATCTGAC；

ABB6：

F:TGGTGTGTCCTAGCGTGAAG，

R:CGTACCCTCCAAACCGATAA；

ABB7：

F:GAGGAACCTGGCAAAGTGAC，

R:GGAGACAGGGCTTGTGATGT；

ABB10：

F:TCTGTTCCCAGATAAGGTC，

R:GGGTGGGGTATGAAGATG；

ABB11：

F:GGATAAATTACAAGACAGGAAA，

R:GCTCCTCCGCTATGAGTC；

ABB12：

F:ATAGTTTTAGTTCAGGTG，

R:TGATGGTTTTAGAGTAAT；

MSUT2：

F:GAATCCTAAACAGGTTAAACACA，

R:TATTACATTGTCTTCTGGTTTGC；

MSUT4：

F:GTGTCCAACTGTAGATGA，

R:TGAGTAATATTCTTTTCTCT；

UT3：

F:GTGTTTGGGTAAAGGCATAGGA，

R:TCACTCCAGTGGCTTCCTTC；

UT35：

F:CTCCCTAGTAAGTAGAAAGCACA，

R:GTATGTGGACCCAGGTTTGA；

UT36：

F:AGACTCAGGAAGTCTGGAGTGGGA，

R:CTTTCGGCTCAGGGATCGAGC；

UT38：

F:ATTATTGATGAGCAGGGACAG，

R:CTAAAGCAACAACATGTGAATG。