[發明專利]鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010944673.8
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112062819A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 管慶豐;楊慧;韓謙;張海文;廖承紅;趙建國;王金花;劉又銘
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/70;A61K39/02;A61P31/04
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 劉召民

1.鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白，其特征在于，編碼所述鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的制備方法，包括以下步驟：

1)以鴨疫里默氏桿菌的基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR擴增引物為：

BamD F-BamHⅠ：5′-GGATCCTACGACCTAGCAATGAAA-3′，

BamD R-NotⅠ：5′-GCGGCCGCCTGTTCTACTAACTTTTCT-3′；

2)將步驟1)獲得的PCR產物與克隆載體連接，轉化，提取質粒并測序；

3)將步驟2)測序正確的質粒與表達載體酶切連接，得重組原核表達質粒；

4)將步驟3)提取的重組質粒轉化到表達宿主菌誘導表達，得鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白。

4.根據權利要求3所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的制備方法，其特征在于，步驟2)中，與克隆載體pMD-19T simple vector連接，連接產物轉化大腸桿菌DH5α。

5.根據權利要求3所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述表達載體采用pET-28a載體，采用BamHⅠ和NotⅠ雙酶切、T4 DNA連接酶連接。

6.根據權利要求3所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的制備方法，其特征在于，步驟4)中，表達宿主菌采用大腸桿菌BL21。

7.根據權利要求6所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白的制備方法，其特征在于，步驟4)中，還包括：通過IPTG誘導大腸桿菌表達的包涵體利用6mol/L鹽酸胍和LDAO進行復性，并通過鎳柱進行純化。

8.抗鴨疫里默氏桿菌感染的通用型亞單位疫苗，基于權利要求1或2所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白制成。

9.權利要求1或2所述的鴨疫里默氏桿菌BamD重組蛋白在制備防治鴨疫里默氏桿菌的藥物中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述防治鴨疫里默氏桿菌的藥物包括抗鴨疫里默氏桿菌感染的亞單位疫苗。