[發明專利]一種LAMP檢測蕓薹生鏈格孢的引物及方法

有效

• 申請號: 202010941603.7
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN111926105B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 余方偉;王神云;張偉;李建斌;于利
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院;南京利華農業科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種LAMP檢測蕓薹生鏈格孢的方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）提取蕓薹生鏈格孢基因組DNA；

（2）以步驟（1）提取的基因組DNA為模板，利用引物進行LAMP擴增；

所述引物序列如下：

F3：5’-ACAGGTTCGATTTCCGCAA-3’；SEQ ID NO.1；

B3：5’-TCTCCGGGTTGTGCATGT-3’；SEQ ID NO.2；

FIP：5’-CGATGACCAGGAGGGTGGGATTATGGCCTTGGTCCCGATA

G-3’；SEQ ID NO.3；

BIP：5’-CTCGTGGTCCCAAAGGAAAGGACGTAGATGAAGTCGTC

GCC-3’；SEQ ID NO.4；

LF1：5’-CACTACCACCAGATCTTTTACCTC-3’；SEQ ID NO.5；

LB1：5’-AGTTTATGACACGGACGAGGA-3’；SEQ ID NO.6；

所述LAMP擴增的擴增體系共25 μL，具體組分如下：20 mM Tris-HCl pH 8.8，50 mMKCl，10 mM (NH₄)₂SO₄，6 mM MgSO₄，0.1% Tween-20，1 mM dNTPs，1 M Betaine，0.8 μM FIP和0.8 μM BIP，0.4 μM LF1和0.4 μM LB1，0.2 μM F3和0.2 μM B3，120 μM HNB，1 μL Bst2.0 WarmStart DNA Polymerase，1 μL模板DNA，加ddH₂O補足至25 μL；反應條件為65℃，1h；

（3）LAMP產物檢測：在反應結束后，直接觀察反應液顏色變化；或者通過瓊脂糖凝膠電泳檢測；

所述通過瓊脂糖凝膠電泳檢測的具體操作如下：首先配制2%瓊脂糖，煮沸稍冷卻后加入稀釋10000倍的核酸染料GelRed，混勻后倒入模具制膠，LAMP反應結束后取10 μL上樣，130 V電泳20 min后用凝膠成像系統觀察結果。