[發明專利]治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010939657.X
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN112255326A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 黨金玲;鄭琳松;賈國棟;由慶睿;潘謳東;吳周凱凱;陳井波
• 申請（專利權）人: 和元生物技術（上海）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 侯武嬌

本發明涉及治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法，治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法包括以下步驟：獲取聚乙烯亞胺對照品；采用高效液相色譜?電霧式檢測器聯用技術檢測對照品；獲取待測品；采用高效液相色譜?電霧式檢測器聯用技術檢測待測品；比對對照品和待測品的檢測結果，獲得待測品中聚乙烯亞胺的含量。上述方法能夠準確檢測治療產品中聚乙烯亞胺含量。

技術領域

本發明涉及儀器分析技術領域，特別涉及治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法。

背景技術

近年來，基因治療作為一種新型療法快速發展，數款基因治療產品如Luxturna、Yescarta、T-vec、Strimvelis等陸續推上市場。基因治療產品的治療效果很大程度上依賴于基因轉染系統，即通過使用特定的轉染試劑將帶有目的基因的載體運送至細胞內。

目前，應用最廣泛的轉染試劑包括陽離子脂質體和陽離子聚合物。其中，陽離子脂質體在體外基因轉染中具有很高的效率，但在體內，它會被迅速清除，并在肺組織內積累，誘發強烈的抗炎反應，且具有毒性，因此應用受到限制。而陽離子聚合物聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)為人工合成的聚合物，是一種含有極高密度正電荷的有機大分子陽離子聚合物，其可以將DNA凝聚成緊密的顆粒，進入細胞，并將DNA吸收到細胞核中，是目前較為有效的聚陽離子型基因載體，被廣泛應用于DNA載體的設計。然而，隨著PEI用量的增大，其細胞毒性也隨之升高，故治療產品中PEI殘留對臨床用藥安全性具有很大影響，在產品放行檢測時檢測PEI殘留量(即PEI含量)具有較大意義。目前并沒有PEI含量檢測方法，因此，急需研發一種能夠準確檢測治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法。

發明內容

基于此，有必要提供一種能夠準確檢測治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法。

高效液相色譜-電霧式檢測器聯用技術在檢測治療產品中聚乙烯亞胺含量中的應用。

在其中一實施例中，所述治療產品為含有聚乙烯亞胺載體的基因治療產品。

在其中一實施例中，所述高效液相色譜-電霧式檢測器聯用技術中的高效液相色譜為尺寸排阻高效液相色譜。

一種治療產品中聚乙烯亞胺含量的檢測方法，包括以下步驟：

獲取聚乙烯亞胺對照品；

采用高效液相色譜-電霧式檢測器聯用技術檢測所述對照品；

獲取待測品；

采用高效液相色譜-電霧式檢測器聯用技術檢測所述待測品；

比對所述對照品和所述待測品的檢測結果，獲得所述待測品中聚乙烯亞胺的含量。

在其中一實施例中，比對所述對照品和所述待測品的檢測結果的步驟中，根據以下公式獲得聚乙烯亞胺的含量：

其中，C表示聚乙烯亞胺的含量(ng/mL)；

m1表示所述對照品的進樣量(ng)；

A1表示所述對照品的峰面積；

A2表示所述待測品的峰面積；

V2表示所述待測品的進樣體積(mL)。

在其中一實施例中，所述治療產品為含有聚乙烯亞胺載體的基因治療產品，所述高效液相色譜為尺寸排阻高效液相色譜。

在其中一實施例中，獲取待測品的步驟包括以下步驟：

將待測治療產品和溶劑進行混合，得到混合液；

將所述混合液進行超濾離心處理，收集濾液，所述濾液即為所述待測品。