[發(fā)明專利]一種代謝物蛋白互作檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010939416.5
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN112051342A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何敬全;黃強(qiáng);范艷群;高廣東
• 申請（專利權(quán)）人: 上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31333
• 代理人: 張靜

1.一種代謝物蛋白互作檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)總蛋白的提取：從樣品中取10～40ug總蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE電泳；

(2)代謝物與蛋白的孵育：固定代謝小分子與總蛋白共同孵育為實驗組；以總蛋白孵育為對照組，將兩組分別進(jìn)行孵育；

(3)蛋白的酶解：將孵育后的實驗組和對照組樣本進(jìn)行還原、烷基化以及胰酶酶解處理；

(4)肽段收集和檢測：利用C18 column分別收集實驗組和對照組的肽段，利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對肽段進(jìn)行檢測分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜柱為C18類型的納升級肽段分析柱。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述樣品母液和溶劑的體積比為1：(80-120)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜洗脫劑由A液和B液組成，所述A液或B液選自水、乙腈、二甲基亞砜、二氯甲烷中的任一種以及0.1～0.3％v/v的緩沖液的混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述緩沖液選自檸檬酸、甲酸、磷酸中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜按照梯度程序洗脫，為2～5％B液洗脫110min，再以20～40％B液洗脫5min，再以70～90％B液洗脫0.1min，之后以5％B液洗脫至4.9min結(jié)束，總用時120min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)譜采用正離子模式，一級掃描范圍為350～1600Da，二級掃描范圍依賴于一級母離子質(zhì)荷比自動選擇。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述定性定量分析中固定修飾選擇Carbamidomethyl(C)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述定性定量分析中可變修飾選擇Oxidation(M)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述肽段假陽性率FDR1％。