[發明專利]一種代謝物蛋白互作檢測方法在審
| 申請號： | 202010939416.5 | 申請日： | 2020-09-09 |
| 公開（公告）號： | CN112051342A | 公開（公告）日： | 2020-12-08 |
| 發明（設計）人： | 何敬全;黃強;范艷群;高廣東 | 申請（專利權）人： | 上海百趣生物醫學科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333 | 代理人： | 張靜 |
| 地址： | 201800 上海市嘉定區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 代謝物 蛋白 檢測 方法 | ||
1.一種代謝物蛋白互作檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)總蛋白的提取：從樣品中取10～40ug總蛋白，進行SDS-PAGE電泳；
(2)代謝物與蛋白的孵育：固定代謝小分子與總蛋白共同孵育為實驗組；以總蛋白孵育為對照組，將兩組分別進行孵育；
(3)蛋白的酶解：將孵育后的實驗組和對照組樣本進行還原、烷基化以及胰酶酶解處理；
(4)肽段收集和檢測：利用C18 column分別收集實驗組和對照組的肽段，利用液相色譜-質譜聯用儀對肽段進行檢測分析。
2.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜柱為C18類型的納升級肽段分析柱。
3.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述樣品母液和溶劑的體積比為1：(80-120)。
4.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜洗脫劑由A液和B液組成，所述A液或B液選自水、乙腈、二甲基亞砜、二氯甲烷中的任一種以及0.1～0.3％v/v的緩沖液的混合。
5.根據權利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述緩沖液選自檸檬酸、甲酸、磷酸中的一種或多種。
6.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述液相色譜按照梯度程序洗脫，為2～5％B液洗脫110min，再以20～40％B液洗脫5min，再以70～90％B液洗脫0.1min，之后以5％B液洗脫至4.9min結束，總用時120min。
7.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述質譜采用正離子模式，一級掃描范圍為350～1600Da，二級掃描范圍依賴于一級母離子質荷比自動選擇。
8.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述定性定量分析中固定修飾選擇Carbamidomethyl(C)。
9.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述定性定量分析中可變修飾選擇Oxidation(M)。
10.根據權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述肽段假陽性率FDR1％。
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