[發明專利]一種南瓜籽多肽的制備方法

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• 申請號: 202010938025.1
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN112011585A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 雷芬芬;羅會兵;何東平;萬方云;鄭竟成;張立偉;楊晨
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學;寶得瑞（湖北）健康產業有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12P21/00;A23L33/18
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 沈雄

1.一種南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、將南瓜籽粕與正己烷按質量與體積比1：5～10g/mL混合均勻，將其加熱脫脂，并回收正己烷，干燥4～6小時后得到脫脂南瓜籽粕，將脫脂南瓜籽粕粉碎，過55～65目篩，得到脫脂南瓜籽粕粉；

步驟二、將所述脫脂南瓜籽粕粉與蒸餾水按料液比1:3～8g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH調節所述粕粉混合液pH值至8～10，在溫度45～60℃下攪拌反應3～5小時，離心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL調節所述粕粉上清液pH值至4.0～6.0，在溫度45～60℃下攪拌反應3～5小時，離心得到沉淀，采用去離子水洗滌沉淀至中性，將所述沉淀冷凍干燥，得到南瓜籽粕蛋白；

步驟三、將所述南瓜籽粕蛋白在球磨儀中進行研磨處理，得到南瓜籽粕蛋白粉，將所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸餾水配制成質量分數為5～10％的蛋白溶液，用1mol/L NaoH調節所述蛋白溶液pH值至8～10，向其加入一次復合酶在水浴條件下進行酶解，得到酶解液，將酶解液于沸水浴中滅酶10～20分鐘后冷卻至室溫，離心取酶解上清液冷凍干燥,得到蛋白酶解物；

步驟四、將所述蛋白酶解物用蒸餾水配制成質量分數為30～50％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH調節所述酶解物溶液pH值至8～10，向其加入二次復合酶和外源氨基酸在水浴條件下催化發生Plastein反應，待Plastein反應結束再于沸水浴中滅酶10～20分鐘，離心取反應后的上清液，得到反應修飾物溶液；

步驟五、將所述反應修飾物溶液用旋轉蒸發器濃縮，得到濃縮液；

步驟六：將所述濃縮液進行冷凍干燥，即得南瓜籽多肽。

2.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟一中加熱脫脂條件如下：加熱溫度50～60℃，加熱時間1.5～3小時。

3.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟三中研磨處理時間為5～15分鐘。

4.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟三中的酶解條件如下：酶解溫度50～60℃，酶解時間8～14小時。

5.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述一次復合酶為質量比1:1的堿性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次復合酶的添加量為所述南瓜籽粕蛋白粉質量的1～3％。

6.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟四中的Plastein反應條件如下：反應溫度50～60℃，反應時間8～14小時。

7.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述二次復合酶為質量比1:1的風味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次復合酶的添加量為所述蛋白酶解物質量的1～3％。

8.如權利要求7所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述外源氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一種，所述外源氨基酸的添加量為所述蛋白酶解物質量的1～3％。

9.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟五中的濃縮條件如下：控制真空度為0.04～0.08MPa，溫度為55～60℃，使其固形物質量分數為45～75％。

10.如權利要求1所述的南瓜籽多肽的制備方法，其特征在于，所述步驟六中的冷凍干燥條件如下：冷凍干燥真空度20～30MPa，冷凍干燥溫度-20～-40℃下，冷凍干燥時間36～48小時。