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[發明專利]一種高效生產1,3-丙二醇的基因工程菌及其構建方法與應用有效

專利信息
申請號: 202010935797.X 申請日: 2020-09-08
公開(公告)號: CN111996157B 公開(公告)日: 2022-07-08
發明(設計)人: 馬春玲;王瑞明;李丕武;王艷霞 申請(專利權)人: 齊魯工業大學
主分類號: C12N1/21 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12P7/18;C12R1/22
代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219 代理人: 劉文容
地址: 250353 山東*** 國省代碼: 山東;37
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 高效 生產 丙二醇 基因工程 及其 構建 方法 應用
【權利要求書】:

1.一種高效生產1,3-丙二醇的基因工程菌,所述基因工程菌同時強化表達1,3-丙二醇氧化還原酶和甲酸脫氫酶,所述基因工程菌為重組的肺炎克雷伯氏菌,其特征在于,所述1,3-丙二醇氧化還原酶為來自大腸桿菌的1,3-丙二醇氧化還原酶同工酶,其編碼基因為YqhD,核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述甲酸脫氫酶為來自奧奈達希瓦式菌MR-1的甲酸脫氫酶,其編碼基因為FdhD,核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;

所述基因工程菌的構建方法包括如下步驟:

(1)將載體質粒pET28a上的T7啟動子替換為肺炎克雷伯氏菌中1,3-丙二醇氧化還原酶啟動子dhat,構建表達載體pET28a-dhat

(2)將大腸桿菌的1,3-丙二醇氧化還原酶同工酶基因YqhD插入pET28a-dhat,構建表達載體pET28a-dhat-YqhD

(3)將奧奈達希瓦式菌MR-1的甲酸脫氫酶基因FdhD插入pET28a-dhat-YqhD,構建表達載體pET28a-dhat-YqhD-FdhD

(4)將表達載體pET28a-dhat-YqhD-FdhD轉化進肺炎克雷伯氏菌,挑選陽性重組子,得基因工程菌K.pneumoniae/pET28a-dhat-YqhD-FdhD

2.如權利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌構建所用的表達載體中1,3-丙二醇氧化還原酶基因位于甲酸脫氫酶基因的上游,1,3-丙二醇氧化還原酶基因的表達采用肺炎克雷伯氏菌中1,3-丙二醇氧化還原酶啟動子dhat

3.如權利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述1,3-丙二醇氧化還原酶的酶活是出發菌株的3.25倍,所述甲酸脫氫酶的酶活為0.45U/mg。

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